Ɛntäämɛ†Gua̱a̱th in cieŋ naath thi̱n ɛntäämɛ: OX11 0DE, UK, Dai̱mɔn Buildiŋ, Ɣa̱rwɛl Thaany kɛnɛ Innöbɛciɔn Park, Dietkɔt, Ɣɔdhi̱puɔɔdthai̱r, UK, Dai̱mɔn Lait Thuɔ̱rth Kɔ., Ltd., Elɛkto̱nik Baölöji̱kal I̱mëjiŋ Thäntɛr.
Kä riakciɔn thäntɛr lai̱t-ɣarbɛthiŋ kɔmpi̱lɛk 1 (RC-LH1) ɛ jɛn kɔɔr pötöthi̱änthetik kɔmpönɛnt duŋ purpul pötötröpik baktëria. Cu nɛy rɛw nööŋ ɛ la krayö-elektrɔn mai̱kröthkɔɔpi̱ i̱thtra̱kciɛri̱ nyin RC-LH1 kɔmpi̱lɛk mi̱ bä kä Rödöptheudömöna̱th paluthtiri̱th. Kä 2.65-Å rethölucin i̱thtra̱kciɛr duŋ RC-LH114-W kɔmpi̱lɛk tëkɛ tha̱buni̱t LH1 luɔpni̱ 14 ti̱ ca go̱l ɛ RC, min ca ya̱r ɛ prötien W, niɛ gua̱a̱ mɔ kɔmpi̱lɛk mi̱ thiɛl prötien-W ɛ mi̱ ci̱ RC kɔmpi̱öthi̱cin kɛɛliw go̱l ɛ RC. Cuɛ 16 tha̱buni̱t LH1 lɔɔp gäk. Kä pääri̱ i̱thtra̱kciɛri̱ ti̱ti̱ cuɛ ŋuni̱ ŋäc mi̱ ro̱ŋ rɛy dai̱na̱mikni̱ duŋ kuinɔn rɛy RC-LH1 kɔmpi̱lɛk, cu määni̱ mëë ca kɔnpörmecinal gɛr kä /ka̱nɛ ŋa̱c ni̱ wal mi̱ ca kuinɔn mat kä RC QB thayt, ɛ päär bä kɛ gua̱a̱th in te audhi̱li̱ɛri̱ kuinɔn baindiŋ thaytni̱ thi̱n, min luäk kɛ naŋdiɛn kä RC. Kä i̱thtra̱kciɛr in rɛlrɔ kä W prötien gaŋɛ gäk LH1 lɔɔp, kɛ kui̱c ɛmɔ bɛ cu nööŋni̱ duɔ̱ɔ̱p mi̱ bi̱ kuinɔn/kuinölön gërdɛ rɔ jakä pɛ̈th.
Kä enerji̱ min nööŋkɛ ɛ pötöthi̱änthethi̱th bɛ tëk kɛɛliw jakä te thi̱n wi̱i̱muɔ̱ɔ̱n, kɛnɛ ɣöö jɛn tëkɛ lua̱ŋ mi̱ di̱i̱t kɛ kui̱ thölar baötekinölöji̱. Niɛ gua̱a̱ mɔ cuɛ pötöthi̱änthethi̱th glöbal jakä wä nhial, purpul pötötröpik baktëria bä nyothɛ enerji̱ mödɛli̱ ti̱ gööl kɛnɛ lua̱ŋ metɛbölik. Kɛn bi̱ kɛn pötöthi̱änthethi̱th lo̱k kɛnɛ ɣöö bi̱ kɛn piith cie ɣe̱ti̱rötröpik baktëria rɛy muɔ̱th, bi̱ kɛn nai̱tröji̱n kɛnɛ karbön daiɣɔkthaid riali̱kä, bi̱ kɛn ɣai̱dröji̱n nööŋ, kɛnɛ ɣöö bi̱ arömatik kɔmpuɔɔni̱ kulɛ wä piny (1-3). Kɛ ɣöö ba enerji̱ nööŋ kɛ kui̱ lätni̱ ti̱ti̱, buay bɛ yi̱k tekɛ pɛ̈th kɛnɛ ɣöö bɛ rɔ yi̱k gɛr ɛ la kemi̱kal enerji̱. Ɛn la̱t ɛmɛ tuɔɔkɛ mi̱ ci̱ buay-in käp antenna kɔmpi̱lɛk buay naŋ kä bɛ enerji̱ in caa käp naŋ kä riakciɔn thäntɛr (RC), kɛ kui̱c ɛmɔ bɛ cu tok kɛ dääk ca̱rji̱ (4-7). Kä bɛthik yunit duŋ pötöthi̱änthethi̱th rɛy purpul pötötröpik baktëria ɛ mi̱ tekɛ ta̱a̱ 2 RC, ca go̱l ɛ buay-ɣarbɛthiŋ kɔmpi̱lɛk 1 (LH1), min no̱o̱ŋ RC-LH1 kɔɔr kɔmpi̱lɛk. LH1 ɛ mi̱ la nööŋkɛ ɛ arrɛy duŋ αβ ɣe̱ti̱rödaimɛri̱ ti̱ ca rɔ̱ ri̱e̱w, kɛl kä kɛ matdɛ baktëria klöröpi̱ll rɛw (BChl) ɛ möli̱ki̱öli̱ kɛnɛ kɛl kiɛ karotinöidni̱ rɛw (8-12). Kä LH1 antenna min thi̱a̱k ɛlɔ̱ŋ tëkɛ 16 kiɛ 17 αβ ɣe̱ti̱rödaimeri̱ ti̱ ca go̱l ɛ RC (9-13) rɛy lɔɔp mi̱ ca gäk, duŋni̱ ɣöö rɛy kɔɔr kɔmpi̱lɛkni̱ kɔ̱kiɛn, tra̱ni̱thmembi̱ran peptaidni̱ la gaŋɛ ŋotdɛ kä min ca go̱l ɛ LH1, Kɛ kui̱c ɛmɔ bɛ kuinöl/kuinön kɔmpi̱öciɔn jakä wä nhial kam bRC1, 13-15). Kä purpul pötötröpik pi̱lɛn Rödöpthi̱udömöna̱th (Rps.) ɛ mödɛl ɣɔrgani̱dhi̱öm min bi̱ enerji̱ kɛnɛ elɛkti̱rɔn ja̱liɛn ŋa̱c min luäk pötöthi̱änthethi̱th. Kä kri̱thtal i̱thtra̱kciɛr in nhiam duŋ Rps. Kä mödɛl duŋ paluthtiri̱th RC-LH1 kɔmpi̱lɛk ɛ RC, ca go̱l ɛ ɣe̱ti̱rödai̱merik LH1 lupni̱ 15, min ca ya̱r ɛ prötien mi̱ kueckɛ mi̱ cɔali̱ "Prötien W" (14). Prötien-W cua ŋa̱c kɛ kɔrɛ cie RPA4402, min ɛ mi̱ /ka̱n ciɛŋdɛ ŋa̱c 10.5kDa prötien kɛ tra̱ni̱thmembi̱ran ɣeli̱thni̱ diɔ̱k ti̱ ca mar (TMH) (16). Cu nɛy ɛ lar ɛn ɣöö ba rpa4402 ji̱i̱n enkɔɔdiŋ prötien W nyɔk kɛ loc thi̱n ɛ wä kä pufW kɛ ɣöö bɛ cuɔ̱ŋ kɛ ci̱öt in lät kɛ ji̱i̱ni̱ tin enkɔɔdiŋ RC-L, M (pufL, pufM) kɛnɛ LH1α, β (pufA, pufB) tha̱buni̱ti̱ni̱. Ɛn min gɔaa ɛlɔ̱ŋ, ɛn prɔti̱i̱n-W tëë thi̱n kärɔa rɛy 10% kä RC-LH1, nyoothɛ Rps. palustrith la no̱o̱ŋɛ RC-LH1 kɔmpi̱lɛkni̱ rɛw ti̱ gööl. Ɛn wa̱nɛ, cua lat i̱ ɣai̱-rethölucin krayö-EM (krai̱ö-EM) i̱thtra̱kciɛri̱ duŋ kɔɔr kɔmpi̱lɛkni̱ rɛw, kɛl kɛ prötien W kɛnɛ 14 αβ ɣe̱ti̱rödaimɛri̱, min dɔ̱ŋ thiɛlɛ prötien W kɛnɛ ɣöö ɛ mi̱ ca gäk 16 Ɣe̱ti̱rödai̱mer LH1 lɔɔp. I̱thtra̱kciɛr dan cuŋɛ la ka̱a̱th mi̱ ci̱ rɔ gɛr rɛy ŋäcä RC-LH1 kɔmpi̱lɛk duŋ Rps. palustrith, kɛ ɣöö kɔn cua ɣömöjeni̱öth puɔ̱pulëcin duŋ barian kɛl diel guec kɛnɛ ɣöö tekɛ rethölucin mi̱ ro̱ŋ kɛ läthdɛ lät ɛ jɔc kä peptaid kärɔa kɛnɛ pi̱gmɛni̱ tin ca yian kɛnɛ lipidni̱ tin thi̱ääk kɛnɛ kuinöni̱. Kä pääri̱ i̱thtra̱kciɛri̱ ti̱ti̱ cuɛ nyoth i̱ kɛn TMH prötieni̱-W diɔ̱k tin /ka̱n jiek rɛy ɛni̱ RC-LH1 kɔmpi̱lɛk kɔ̱kiɛn ɛ wä ni̱ täämɛ cuɛ kuinɔn canɛl nööŋ kɛ pɛ̈th kuinɔn/kuinölön gër. Ɛn nämbär in ca tɔ̱w kä lipid kɛnɛ kuinɔn baindiŋ thaytni̱ cua kɛ ŋa̱c, kɛnɛ ɣöö cua kɔnpörmecinal mi̱ ji̱di̱t nyoth kɛ kɔr matdä kuinɔn kɛnɛ RC, min dɔ̱ŋ bɛ rɔ lot kɛ pötöthi̱thtɛm II (PSII) RC duŋ ɣɔkdhi̱jenɛted pötötröpik ɣɔrgani̱dhi̱ömni̱. Kä min ca jiek kä kɔn cuɛ ŋuni̱ ŋäc mi̱ ji̱di̱t rɛy kai̱netikni̱ duŋ kuinɔn/kuinölön baindiŋ kɛnɛ gër rɛy RC-LH1 kɔɔr kɔmpi̱lɛk duŋ purpul pötötröpik baktëria.
Rɛy kä ɣöö ba ŋi̱i̱cdɛ jakä thi̱a̱k kɛ kui̱ kɔmpi̱lɛkni̱ rɛw tin ca jiek rɛy Rps. palustrith, kɔn cua RC-LH1 kärɔa da̱a̱k kɛ ca̱a̱p baökemikal. Kä prötien W-depi̱ciɛn kɔmpi̱lɛk (kɛ kɔrɛ ba cu cɔl i̱ ΔpufW) cua riali̱kä kä i̱thtrain mi̱ thiɛl pufW ji̱i̱n (16), kɛnɛ ɣöö ɛ RC-LH1 kɔmpi̱lɛk kɛl kärɔa cua nööŋ. Kä prötien W-min tekɛ kɔmpi̱lɛk ɛ mi̱ la nööŋkɛ ɛ i̱thtrain. Kä prötien W duŋ i̱thtrain ɛmɛ cua riali̱kä kɛ 10x Ɣi̱th tag kä C-termina̱thdɛ, kɛ kui̱c ɛmɔ prötien W-min tekɛ kɔmpi̱lɛk bɛ cu lät ɛ gɔaa kɛ matdɛ kɛ prötien W min thiɛl ɛlɔ̱ŋ ɛ la mi̱ /ci̱ landiit bi̱ ja̱l. Kä kɔmpi̱lɛk cuɛ tekɛ dääk mi̱ gɔa (16) Appi̱ni̱ti̱ Krömatögra̱pi̱ (IMAC).
Cie min ca nyoth rɛy Thurɛ 1, kɔmpi̱lɛkni̱ rɛw tekɛ tha̱b-yunitni̱ diɔ̱k RC (RC-L, RC-M kɛnɛ RC-H) ti̱ ca go̱l ɛ LH1 antenna. Kä 2.80-A i̱thtra̱kciɛr duŋ kɔmpi̱lɛk min thiɛl prötien-W nyothɛ 16 αβ ɣe̱ti̱rödaimeri̱, cuɛ LH1 lɔɔp mi̱ ca gäk nööŋ mi̱ ci̱ RC go̱l kɛɛliw, kɛ kɔrɛ ba cu cɔl i̱ RC-LH116 kɔmpi̱lɛk. Kä 2.65Å i̱thtra̱kciɛr duŋ prötien-W-min tekɛ kɔmpi̱lɛk tëkɛ 14-ɣe̱ti̱rödai̱mer LH1 mi̱ ca ya̱r ɛ prötien-W, kɛ kɔrɛ ba cu cɔl i̱ RC-LH114-W.
(A kɛnɛ B) Gua̱a̱th in cuŋ ɛ la kɔmpuɔɔn. (C kɛnɛ D) Bond pi̱gmɛni̱ cua kɛ nyoth rɛy rɔdni̱. (E kɛnɛ F) Kä kɔmpi̱lɛkni̱ tin ca guic kä thai̱töpla̱thmik thɔ̱rpëth tekɛ peptaidni̱ kɛnɛ LH1 tha̱buni̱ti̱ni̱ ti̱ cuŋ ɛ la rɛy kartuni̱, kɛnɛ ɣöö kɛn nämbäri̱kɛ ɛ wä kä thaak ɛ jiɛn kä prötien-W gap [cuɛ te thi̱n kɛ nämbäri̱ Rba. i̱thpi̱e̱e̱röidni̱ kɔmpi̱lɛk (13)]. Kɛ kui̱ LH1-α, ɛn biɛl prötien tha̱buni̱t ɛ mi̱ tɔ̱c; kɛ kui̱ LH1-β, ɛn biɛl prötien tha̱buni̱t ɛ mi̱ yie̱l; kɛ kui̱ prötien-W, ɛn prötien ɛ mi̱ lual; kɛ kui̱ RC-H, jɛn ɛ cyan; kɛ kui̱ RC-L, ɛ jɛn Örɛn; kɛ kui̱ RC-M, magɛnta. Köpaktɔri̱ kɛn cuŋkɛ ɛ la rɔdni̱, mi̱ tɔ̱c cuŋɛ la BChl kɛnɛ BPh ɛ möli̱ki̱öli̱, mi̱ tɔ̱c cuŋɛ la karotinöidni̱, kɛnɛ mi̱ tɔ̱c cuŋɛ la UQ10 möli̱ki̱öli̱. (G kɛnɛ H) Guäcdɛ min ca magni̱pi̱d duŋ prötien-W kam rɛy gua̱th in päär kɛ RC-LH114-W kɔmpi̱lɛk (G) kɛnɛ RC-LH116 kɔmpi̱lɛk (H). Köpaktɔri̱ kɛn cua kɛ nyoth rɛy gua̱th mi̱ ci̱ thia̱a̱ŋ, chelated kuinɔn cua kɛ nyoth kɛ mi̱ yie̱l. Kä prötien-W kamdɛ cua nyoth ɛ bëër ti̱ ca ŋuɔ̱k ti̱ yie̱l rɛy (G), kɛnɛ puɔ̱l tin tɔatni̱ gua̱th in bi̱ kuinɔn/kuinölöl däk piny kä LH116 riŋ cua kɛ nyoth ɛ bëër ti̱ ca ŋuɔ̱k ti̱ bo̱r rɛy (H).
Thurɛ 1 (A kɛnɛ B) nyothɛ RC min ca go̱l ɛ arrɛyni̱ ti̱ ca lɛp kiɛ ca gäk kä LH1αβ ɣe̱ti̱rödaimeri̱, kɛl kä kɛ matdɛ BChl rɛw kɛnɛ karotinöid kɛl (Pi̱guur 1, C kɛnɛ D). Ŋi̱i̱cni̱ tëë nhiam cua nyoth i̱ Rps ɛ jɛn LH1 kɔmpi̱lɛk. Rɛy baöthänthethtik pathway duŋ i̱thpi̱rulina dhanthin, i̱thpethi̱thni̱ ti̱ti̱ tekɛ puɔ̱pulëcini̱ ti̱ ca li̱ɔɔm kä karotinöidni̱ (17). Cieŋni̱ min, i̱thpi̱röpai̱rödhanthin ɛ jɛn karotinöid in di̱tni̱ jɛn kɛnɛ ɣöö di̱tdɛ ro̱ŋɛ. Kɛ kui̱c ɛmɔ, cua kɔ kuany i̱ ba mödɛl i̱thpi̱rödhanthin kä LH1 baindiŋ thaytni̱ diaal. Kä alpa kɛnɛ beta pöli̱peptaidni̱ kɛn kɛ thi̱ŋgil TMHni̱ kɛ membi̱ran mi̱ ciɛk raar ri̱jini̱ (Pi̱guur 1, A, B, E, kɛnɛ F). Cieŋni̱ min ɛn denthi̱ti̱ duŋ rɛthi̱duëli̱ 17 kä C-termina̱th /ka̱nɛ guic, ɛn alpa pöli̱peptaid cua da̱a̱k kä Met1 ɛ wä kä Ala46 rɛy kɔmpi̱lɛkni̱ rɛw. β pöli̱peptaid cua jakä kuiy kä Gly4 ɛ wä kä Tyr52 rɛy RC-LH116, kɛnɛ kä Ser5 ɛ wä kä Tyr52 rɛy RC-LH114-W. /Thiɛlɛ denthi̱ti̱ duŋ 3 kiɛ 4 N-terminal kiɛ 13 C-terminal rɛthi̱duëthni̱ ti̱ cua guic (Pi̱guur S1). Ma̱th i̱thpekti̱römeti̱ri̱ anali̱thi̱th duŋ mi̱ ca li̱ɔɔm kɛ RC-LH1 kɔmpi̱lɛk mi̱ ca riali̱kä kä wild-taap i̱thtrain cuɛ nyoth i̱ jɛn ri̱jin ëë ci̱ bath cuɛ ben raar kä ɣeterölöji̱öth kli̱bɛj duŋ peptaidni̱ ti̱ti̱ (Pi̱guur S1 kɛnɛ S2). Kä N-terminal puɔrmi̱lɛciɔn duŋ α-Met1 cua guic bä (f). Kä anali̱thi̱th cuɛ nyoth i̱ α-peptaid tëkɛ rɛthi̱duëli̱ fMet1 ɛ wä kä Asp42/Ala46/Ala47/Ala50, kɛnɛ β-peptaid tëkɛ rɛthi̱duëli̱ Ser2 ɛ wä kä Ala53, min te rɛy matdä mi̱ gɔa kɛ lëth-mi̱ kuiy EM denthi̱ti̱ map.
Kɔrdi̱nɛciɔn duŋ α-Ɣi̱th29 kɛnɛ β-Ɣi̱th36 jakɛ BChls kä guickɛ nhiam; kɛl αβ ɣe̱ti̱rödi̱mer matdɛ rɔ kɛ ji̱ thi̱ääkädɛ kɛ no̱o̱ŋdɛ kɛ lɔɔp mi̱ ca lɛp (RC-LH114-W) kiɛ lɔɔp mi̱ ca gäk (RC-LH116) mi̱ thi̱ääk kɛ RC Kä ɣɛkthi̱tɔn kɔppilɛd pi̱gmɛn arrɛy (Pi̱guur 1, C kɛnɛ D). Mi̱ pa̱a̱rkɛ jɛ kɛ 877 nm ba̱nd duŋ RC-LH114-W, kä 880 nm abdhɔ̱pciɔn red shi̱p duŋ RC-LH116 ɛ 3 nm (Pi̱guur 2A). Cieŋni̱ min, ɛn thärkular di̱kröi̱dhi̱öm i̱thpekti̱ra̱m cuɛ thia̱k kɛ päär (Pi̱guur 2B), cuɛ nyoth i̱ cieŋni̱ min tekɛ dääk mi̱ jɔc kam lɔɔpni̱ tin ca lɛp kɛnɛ tin ca gäk, ɛn gua̱a̱th in te BChls thi̱n cuɛ ca̱a̱t ɛlɔ̱ŋ. Kä abdhɔ̱pciɔn redthi̱p dɔ̱ŋ bɛ ben raar ɛ la mi̱ ci̱ thermal möcin jakä kuiy kɛnɛ rëp i̱thta̱bi̱li̱ti̱ kä lɔɔp in ca gäk (18, 19), kä min gɛɛrɔ rɛy pi̱gmɛn kɔppiŋä min nööŋkɛ ɛ lɔɔp in ca gäk (20, 21), kiɛ matdiɛn kɛn rɛw ti̱ti̱ (11).
(A) Ultrabai̱lɛt/bi̱thi̱bɔl/thia̱kɛ-inpa̱rɛd abdhɔ̱pciɔn i̱thpekti̱ra̱m, kä pi̱i̱kni̱ tin ca kɛ nyoth kɛ pi̱gmɛni̱kiɛn tin cäät kɛnɛ ɣöö cua kɛ jakä wä kä BPh pi̱i̱k kä 775 nm. (B) Thärkular dai̱kröi̱dhi̱öm i̱thpekti̱ra̱m mi̱ ca jakä wä kä BChl abdhɔrbɛnci̱ kä 805 nm. (C kɛnɛ D) Cua kuany ΔA i̱thpekti̱ra kä thaak-in ca riali̱kä kɛ abdhɔ̱pciɔn i̱thpekti̱ra duŋ RC-LH114-W kɔmpi̱lɛk (C) kɛnɛ RC-LH116 kɔmpi̱lɛk (D). Kɛ kui̱ pääri̱diɛn mi̱ gɔa, i̱thpekti̱ra diaal kɛn cua kɛ jakä ŋa̱ckɛ ɛ wä kä ∆A duŋ -A kä 0.2 ps. (E) Kä rɛt duŋ thai̱tökrɔm c2 ɣɔkdhi̱dɛciɔn kɛ kɔr i̱rradiacin rɛydɛ ɛn ɣöö tekɛ kɔncentrɛciɔni̱ ti̱ gööl nyin UQ2 (guic Thurɛ S8 kɛ kui̱ data ni̱ ti̱ /ka̱n met la̱th thi̱n). (F) Rɛy thëlli̱ tin pith piny mi̱ tɔt, mi̱diöm kiɛ buay mi̱ di̱i̱t (10, 30 kiɛ 300μMm-2 s-1, kɛ̈l kɛ̈ɛ̈li̱), kä prötien W kɛnɛ RC-L tha̱buni̱ti̱ni̱ rɛy kɔmpi̱lɛk min ca riali̱kä kɛnɛ membran rɛci̱ö min ca da̱a̱k. Ji̱e̱k prötien lɛbel ɛ SDS-pöliakrilamid jel elektröpörethi̱th kɛnɛ immi̱o̱nöaththay (guic Thurɛ S9 kɛ kui̱ data ni̱ ti̱ /ka̱n met lät). Ji̱e̱k rɛci̱ö min thi̱ääk kɛ RC-LH114-W kɔmpi̱lɛk min ca riali̱kä. Kä i̱thtɔi̱kiömetrik rɛci̱ö duŋ RC-L ɛ wä kä prötien-W duŋ kɔmpi̱lɛk ɛ 1:1.
Kä BChls tin tekä gua̱a̱th 1 rɛy kä min ca gɛr αβ14 lɔɔp duŋ RC-LH114-W (Pi̱guur 1, A, C, kɛnɛ E) kɛn thi̱ääk kɛn kɛ RC pri̱märi̱ dönör (P) ɛ 6.8Å mi̱ läny ekui̱bɛlɛnt BChls rɛy RC-LH116 (Pi̱guur. 1, B, D); cieŋni̱ min, kä tra̱ni̱thiɛn abdhɔ̱pciɔn kinetikni̱ duŋ kɔmpi̱lɛkni̱ rɛw nyothɛ jɛ i̱ kɛ kui̱ RC-LH114-W kɛnɛ RC-LH116, kä ɣɛkthi̱tɛciɔn enerji̱ min naŋ thaak kɔni̱thtani̱ ɛ jiɛn kä LH1 ɛ wä kä RC kɛn kɛ 40 ±4 kɛnɛ 44±3 ps (Pi̱guur 2). , C kɛnɛ D, Thurɛ S4 kɛnɛ Tɛbɛl S2). Kä /thiɛlɛ dääk mi̱ di̱i̱t bä mi̱ ca nyoth rɛy ja̱liɛn kɛɛ elɛkto̱rɔnik rɛydɛ ɛn RC (Pi̱guur S5 kɛnɛ min ca mat thi̱n). Cu nɛy ɛ diw ɛn ɣöö ɛn thi̱ääkdɛ min thi̱ääk kɛ gua̱a̱th in naŋkɛ enerji̱ kam LH1 kɛnɛ RC-P ɛ mi̱ cäät kɛ na̱ndiɛn, ɛŋgɛl kɛnɛ buɔ̱m enerji̱ min di̱tni̱ jɛn kä BChl rɛy LH1 luɔpni̱ rɛw. Jɛn cuɛ ce̱tkɛ mi̱ guicɛ LH1 enerji̱ pattern kɛ copdɛ kä min tɔt kä na̱ndɛ /cɛ pɛ̈th ɛlɔ̱ŋ mi̱ läny enerji̱ min naŋkɛ ɛ wä kä tha̱böpti̱mal thayti̱ni̱ ɛ wä kä RC. Kä öpen-luɔp LH1 luɔp rɛy RC-LH114-W dɔ̱ŋ bɛ tekɛ thermal möciɔn mi̱ thiɛl luɔt rɛy gua̱th mi̱ tekɛ lëth mi̱ tɔt kɛ kui̱ i̱thtra̱kciɛral anali̱thi̱th, kɛnɛ ɣöö bɛ tekɛ αβ14 riŋ kɔnpörmecin mi̱ bäär kä lëth duëël ɛ jiɛn kä pi̱gmɛntecin na̱n duŋ βBChls kä gua̱a̱th in te RC 1 thi̱n.
Kä RC-LH116 kɔmpi̱lɛk tëkɛ 32 BChls kɛnɛ 16 karotinöidni̱, kɛnɛ ɣöö ɛn riali̱dɛ i̱kä kɛɛliw cuɛ päär kɛ min ca jiek kä Thermökrömatiöm (Tch.) pidpidum [Prötien Data Bɛ̈ŋ (PDB) ID 5Y5S] (9), Thiörhödöbi̱briöb P9T9T)9r. (12) kɛnɛ algëë mi̱ tɔ̱c (Blc.biri̱di̱th) (PDB ID 6ET5) (10). Kɛ kɔr kä mëë ca kɛ la̱th gua̱a̱thdiɛn, cua debi̱acini̱ ti̱ tɔatni̱ kärɔ̱ rɛy gua̱thni̱ tin te αβ ɣe̱ti̱rödaimɛri̱ thi̱n cua kɛ guic, ɛlɔ̱ŋ 1-5, 15, kɛnɛ 16 (Pi̱guur S6). Kä prötien-W min te thi̱n tëkɛ mi̱ di̱i̱t mi̱ cɛ gɛr kä i̱thtra̱kciɛr duŋ LH1. TMHni̱kɛ da̱ŋ diɔ̱k caa kɛ mat ɛ lɔɔpni̱ ti̱ ciɛk, kɛ N-terminal kui̱c lumen kä kɔmpi̱lɛk kɛnɛ C-terminal kui̱c thaytöpla̱thmik (Pi̱guri̱ 1A kɛnɛ 3, A ɛ wä kä D). Prötien-W ɛ mi̱ di̱i̱t kä ɣai̱dröpɔbik (Pi̱guur 3B), kɛnɛ ɣöö TMH2 kɛnɛ TMH3 cukɛ röm kɛ LH1αβ-14 kɛ no̱o̱ŋdiɛn kɛ tra̱ni̱thmembi̱ran thɔ̱rpëth (Pi̱guur 3, B kɛnɛ E ɛ wä kä G). Kä min te kamdiɛn ɛ mi̱ di̱tni̱ jɛn kä Phe, Leu kɛnɛ Val rɛthi̱duëli̱ rɛy tra̱ni̱thmembi̱ran ri̱jin. Kɛn tin ci̱ duɔth ti̱ti̱ caa kɛ kuëŋ gua̱a̱th kɛl kɛɛ ɣaidrɔpɔbik aminö athid kɛnɛ αβ-14 pi̱gmɛni̱. Tha̱a̱ŋ pölar rɛthi̱duëli̱ bä luäk kɛn kɛ römdiɛn, cu määni̱ ɣai̱dröji̱n bɔn kam W-Thr68 kɛnɛ β-Trp42 wi̱i̱ kɔmpi̱lɛk kabi̱ti̱ (Pi̱guur 3, F kɛnɛ G). Kä gua̱a̱th in tä thaytɔpla̱thmi̱ thi̱n, ɛn Gln34 thi̱ääkɛ kɛ buɔ̱n ketö duŋ αβ-14 karɔtɛnɔidni̱. Ɛ matkɛ nɛmɛ thi̱n, ɛn n-dɔdecil β-d-maltöthaid (β-DDM) möli̱ki̱öl cua riali̱kä, kä cu jua̱l ɣai̱dröpɔbik räth ni̱ kä röm kam prötien-W kɛnɛ αβ-14, kɛnɛ ɣöö ɛn jua̱l lipid dɔ̱ŋ bɛ te rɛy pua̱a̱ny. Cu nɛy ɛ ŋa̱c bä ɛn ɣöö C-terminal rethölucin ri̱jini̱ nyin prötien W kɛnɛ RCH kɛn thi̱ääk kɛn ɛlɔ̱ŋ, duŋni̱ ɣöö /ci̱kɛ te rɛy i̱thkɔpä min no̱o̱ŋ röm mi̱ caa lɛy (Pi̱guur 1, A kɛnɛ E). Cieŋni̱ min, dɔ̱ŋ bɛ tekɛ röm rɛy C-terminal aminö athi̱dni̱ tin /ka̱n riali̱kä kä prötieni̱ rɛw ti̱ti̱, min dɔ̱ŋ bɛ cu nööŋni̱ mekani̱dhi̱öm kɛ kui̱ kä ɣöö ba prötien-W jiek rɛy gua̱th ëë ca RC-LH114-W kɔmpi̱lɛk mat thi̱n.
(A) Prötien-W, min guic ni̱ gua̱a̱th in röm kɛ LH1αβ14 rɛy kartuun, tëkɛ thurɛ-rod kui̱c gëëk cɛɛn (mi̱lual), cua nyoth rɛy tha̱a̱ŋ elɛktröi̱thtatik buɔ̱mdɛ diagram (tra̱ni̱thparɛnt gi̱rɛy thɔ̱rpëth kɛ kɔntuor lɛbel duŋ 0.13). (B) Prötien-W cuŋɛ la ɣai̱dröpɔbik mi̱ ca biɛldɛ la̱th piny. Pölar kɛnɛ gua̱th tin caa caj thi̱n cua kɛ nyoth kɛ cyan, gua̱th tin ɣai̱dröpɔbik kɛn cua kɛ nyoth kɛ mi̱ bo̱r, kɛnɛ gua̱th tin bum ɣai̱dröpɔbik kɛn cua kɛ nyoth kɛ örɛnyä. (C kɛnɛ D) Prötien-W cuŋɛ ɛ la rɛy kartuun, gua̱a̱thdɛ päärɛ cie min te rɛy (A) (C), kɛnɛ ɣöö ca rɔ ri̱t ɛ 180° (D). Kɛ min ca lar ɛ gua̱a̱thdɛ rɛy thi̱kuɛnthi̱, kä tin ci̱ duɔth tin ca da̱a̱k la naŋkɛ ni̱ bi̱ɛɛl i̱thki̱ɛm mi̱ ci̱ rɔal, gua̱th in bi̱ N-terminal ɛ mi̱ yiel kä C-terminal ɛ mi̱ lual. (E) Prötien-W rɛy guäcdɛ mi̱ cäät cie rɛy (A), kɛnɛ tin ci̱ duɔth kä röm prötien-W:LH1 kɛn cuŋkɛ ɛ la rodni̱ ti̱ ca mat kɛɛl. (F) Prötien-W ɛ mi̱ ca ri̱et 90° mi̱ thi̱ääk kɛ (E) kɛnɛ LH1αβ14 rɛy kartuun min cuŋ ɛ la, kɛnɛ ɣöö thi̱ääkɛ kɛ min ci̱ duɔth kä bar rɛy bar min cuŋ. Kä tin ci̱ duɔth kä beta pöli̱peptaid kɛn cua kɛ lɛbeli̱d. Kä köpaktɔr cua nyoth cie bar mi̱ päär kɛ biɛl duŋ Thurɛ 1, kä min ci̱ däk piny β-DDM cua nyoth ɛ la mi̱ tɔ̱c, kɛnɛ ɣöö ɛn ɣɔkdhi̱ji̱n cua nyoth ɛ la mi̱lual. (G) Kä guäcdɛ rɛy (F) ɛ mi̱ ca ri̱et 180°, kɛ tin ci̱ duɔth kä ca lɛbeli̱ alpa pöli̱peptaid.
Prötien-W bɛ αβ ɣe̱ti̱rödai̱mer guäl (kä 15th rɛy Thurɛ 1F), kɛ kui̱c ɛmɔ bɛ luɔp gaŋ kä ɣöö bɛ rɔ gäk kɛnɛ ɣöö bɛ αβ ɣe̱ti̱rödai̱merni̱ diɔ̱k tin nhiam jakä riet rɔ. Jɛn cua guic i̱ jɛn makdhi̱ma̱m inkli̱nɛciɔn ɛŋgɛl duŋ αβ-1 ɣe̱ti̱rödi̱mer ëë nhiam mi̱ thi̱ääk kɛ pilim nɔrmal cuɛ 25° ɛ wä kä 29°(Pi̱guur 1, A kɛnɛ E), min cua nööŋ ɛ 2° ɛ wä kä 8° inkli̱nɛciɔn duŋ αβ-1 rɛy RC A mi̱ ci̱ rɔal-LH116 kɛnɛ Fi̱guur 1, B). Kä ɣe̱ti̱rödai̱mɛri̱ rɛwdɛ kɛnɛ diɔ̱kdiɛn kɛn cukɛ rɔ̱ ri̱t kä 12° ɛ wä kä 22° kɛnɛ 5° ɛ wä kä 10°,kɛl kɛɛli̱. Kɛ kui̱ i̱thteri̱k hindrant duŋ RC, kä tilt duŋ αβ-1 /cɛ matni̱ thɛkɔnd rɛwdɛ duŋ αβ (min wä kɛɛl kɛ 16th αβ rɛy Thurɛ 1F), kɛ kɔrɛ bɛ cu nööŋni̱ kam mi̱ jɔc rɛy LH1 riŋä (Pi̱guur 1, A kɛnɛ E). Kɛ ɣöö thiɛlɛ αβ ɣe̱ti̱rödai̱mɛri̱ rɛw, cuɛ wä kɛɛl kɛ bath BChl da̱ŋ ŋuaan kɛnɛ karöti̱nɔidni̱ rɛw, cuɛ thiɛl karöti̱nɔidni̱ mi̱ ci̱ rɔ mat kä αβ-1 tha̱buni̱t mi̱ ca rɔ ri̱t, bɛ cu ben raar ɛ la LH114-W riŋ mi̱ tekɛ karöti̱nɔidni̱ 13 Bɛjɛtarian kɛnɛ 28 BChls. Kä lökal rethölucin min ca thɛm kä kɔmpi̱lɛkni̱ rɛw rɛy αβ1 ɛ wä kä 7 ri̱jini̱ kɛn kuiyni̱ kɛn kä tin kɔ̱kiɛn kä LH1 lɔɔp, min dɔ̱ŋ bɛ nyothni̱ inɣɛrent pla̱thtikthi̱ti̱ duŋ LH1 tha̱buni̱t min thi̱ääk kɛ RC QB thayt (Pi̱guur 4).
Kä thurɛni̱ RC-LH114-W (A kɛnɛ B) kɛnɛ RC-LH116 (C kɛnɛ D) cua kɛ nyoth ɛ cäät kɛ guäc nhial/guäc gëëk (A kɛnɛ B) (A kɛnɛ C) kɛnɛ gua̱a̱th in tekɛ kabi̱ti̱ thi̱n kä Thurɛ 1. (B kɛnɛ D). Kä keyni̱ tin ca biɛl la̱th thi̱n ca kɛ nyoth kui̱c cuëëc.
Kä ciɛŋ kɔ̱kiɛn kärɔ̱ kä kɔre kɔmpi̱lɛk kɛ i̱thtɔi̱kiömetrik rɛci̱ö duŋ 1:14 ɛ jɛn Rödökɔkka̱th i̱thpaeroideth (Rba.) RC-LH1-PufX di̱mer (13). Cieŋni̱ min, prötien W kɛnɛ PufX thiɛlɛ kɛ ɣömölöji̱ mi̱ jɔc, kɛnɛ ɣöö tekɛ mi̱ di̱i̱t mi̱ ca gɛr kä LH1 i̱thtra̱kciɛri̱kiɛn kɛ̈l kɛ̈ɛ̈li̱. PufX ɛ thi̱ŋgil TMH kɛ N-terminal thai̱töpla̱thmik dɔmiɛn min röm kɛ thai̱töpla̱thmik kui̱c duŋ RC-H tha̱buni̱t (13) kä gua̱a̱th in wä kɛɛl kɛ Rps. paluthtiri̱th LH116αβ-16. PufX cɛ duɔ̱ɔ̱p mi̱ bi̱ kuinɔn/kuinɔnɔn gɛr kam RC-LH1 kɛnɛ thaytɔkrɔm bcl kɔmpi̱lɛk kɛnɛ ɣöö tëë rɛy Rba kɛɛliw. i̱thpi̱e̱e̱röidni̱ kɔɔr kɔmpi̱lɛk (13). Cieŋni̱ min ɛn mönömer-mönömer intɛrpi̱e̱th ɛ mi̱ te rɛy Rba. Kä i̱thperöidni̱ RC-LH1-PufX di̱mer jɛn tëkä gua̱a̱th in ca prötien W mat thi̱n rɛy RC-LH114-W, kɛnɛ ɣöö ɛn kam in ca nööŋ ɛ PufX kɛnɛ prötien-W jɛn tëkä gua̱a̱th in päär (Pi̱guur S7A). Kä kam rɛy RC-LH114-W jɛn bä cua mat kɛ ɣai̱pöthethtikal kuinɔn canɛl (8) duŋ Ptheudömöna̱th röthia LH1, min cua nööŋ ɛ peptaidni̱ ti̱ /ci̱ thi̱ääk kɛ prötien W kiɛ PufX (Pi̱guur S7B). Ɛ nyɔk bä, ɛn kuinɔn canɛl rɛy Blc. Kä emerald gi̱ri̱i̱n LH1 cua nööŋ ɛ /thiɛlɛ γ tha̱buni̱t kɛl (7) min te rɛy gua̱th mi̱ cäät (Pi̱guur S7C). Cieŋni̱ min ca mat ɛ prötieni̱ ti̱ gööl, ɛn jɔac kä kuinɔn/kuinölɔl canɛli̱ ti̱ti̱ rɛy gua̱th mi̱ ŋa̱ckɛ rɛy RC-LH1 kɔmpi̱lɛk cuɛ ce̱tkɛ mi̱ ɛ cäät duŋ kɔnberjɛnt eboluciɔn, cuɛ nyoth i̱ jɛn kam in ca cak ɛ prötien W dɔ̱ŋ bɛ lät cie kuinɔn canɛli̱.
Kä kam in te rɛy LH114-W luɔp jakɛ kä bi̱ ben ɛ la mi̱ guurɔ membi̱ran ri̱jin kam intɛrnal i̱thpëth duŋ RC-LH114-W kɔmpi̱lɛk kɛnɛ bulk membi̱ran (Pi̱guur 1G), ni̱ ɣöö bɛ dɔmiɛni̱ rɛw röm kɛ rɛy prötien pöör cie rɛy prötieni̱. Kä RC-LH116 kɔmpi̱lɛk jɛn cäätdɛ kɛ Tch mi̱ ca gäk. Ri̱e̱e̱t-ce̱tkɛ kɔmpi̱lɛk (22) (Pi̱guur 1H). Ni̱ mëë ci̱ kuinɔn däk piny rɛy membi̱ran cuɛ pɛ̈th ɛlɔ̱ŋ mi̱ läny däk piny rɛy prötien canal in ciɛk, ɛn LH114-W lɔɔp in ca lɛp bɛ RC jakä ɣöö bɛ rɔ ri̱t kɛ pɛ̈th mi̱ läny LH116 luɔp min ca gäk, kɛnɛ ɣöö ɛn däk piny duŋ kuinɔn rɛy RC dɔ̱ŋ bɛ cu tekɛ mi̱ gaŋkɛ ɛlɔ̱ŋ. Rɛy thëmdɛ mi̱ prötien W bɛ gɛr kä kuinöni̱ kɛ rɛy RC, cua thai̱tökrɔm ɣɔkdhi̱dɛciɔn aththei̱ la̱t kä tha̱a̱ŋ kɔncentrɛciɔn duŋ ubi̱kuinɔn 2 (UQ2) (ɛ analög duŋ näci̱ral UQ10 kɛ ai̱thöpren mi̱ ciɛk) (Pi̱guur 2E). Cieŋni̱ min te kelɛted kuinɔn thi̱n cuɛ gaŋ kɛ jiekdɛ min thuɔ̱k kä min jɔc kä Mikaeli̱th kɔni̱thtan (RC-LH114-W kɛnɛ RC-LH116 kɛn ro̱ŋkɛ kɛ 0.2±0.1μM kɛnɛ 0.5±0.2μM, kɛ̈l kɛ̈ɛ̈li̱), kä rɛt in di̱tni̱ jɛn duŋ RC-LH14.6-1. 28±5% di̱tni̱ jɛn kä RC-LH116 (3.6±0.1 e-RC-1 th-1).
Cu nɛy ɛ car kɛ tukdɛ ɛn ɣöö prötien-W jɛn të thi̱n rɛy kä 10% kä kɔɔr kɔmpi̱lɛk (16); ɛn wa̱nɛ, kä pek in cieŋ kɛ buay-in tɔt, buay-in däär, kɛnɛ buay-in di̱i̱t kä pith thëlli̱ kɛ 15±0.6%, 11±1% kɛnɛ 0.9±0.5, kɛ̈l kɛ̈ɛ̈li̱ % (Pi̱guur 2F). Kuanti̱tɛtib pääri̱ duŋ ma̱th i̱thpekti̱römeti̱ri̱ cuɛ nyoth i̱ matdɛ kɛɛ ɣi̱thtidain tag cuɛ ri̱lɛtib abundanci̱ duŋ prötien-W jakä kuiy mi̱ pa̱a̱rkɛ jɛ kɛ wild-taap i̱thtrain (P = 0.59), bä lɛbeli̱ ti̱ti̱ /ci̱kɛ artipak duŋ prötien-W mi̱ ca riali̱kä (Pi̱guur S10). Cieŋni̱ min, nɛmɛ kuiy prötien-W rɛy RC-LH1 kɔmpi̱lɛk dɔ̱ŋ bɛ tha̱a̱ŋ RCni̱ jakä ɣöö bi̱kɛ rɔ̱ ri̱t kɛ pɛ̈th, kɛ kui̱c ɛmɔ bɛ kulɛ jakä kuiy ɛn kuinɔn/kuinölön min la gër rɛy RC-LH116 kɔmpi̱lɛk. Cu nɛy ɛ ŋa̱c ɛn ɣöö buay in di̱i̱t in ci̱ te thi̱n ɛ mi̱ /ci̱ rɔ lot kɛ data ni̱ tra̱ni̱thkri̱ptömikni̱ ti̱ thi̱a̱k, min nyoth ɣöö pufW ji̱i̱n ëë ca nyoth cuɛ rɔ re̱p piny buayä mi̱ bum (Pi̱guur S11) (23). Kä dääk kam pufW tra̱ni̱thkri̱pciɔn kɛnɛ prötien-W matdɛ rɛy RC-LH1 kɔmpi̱lɛk ɛ mi̱ nyuɔɔn kɛnɛ ɣöö dɔ̱ŋ bɛ nyothni̱ kɔmpi̱lɛk regulɛciɔn duŋ prötien.
Rɛy RC-LH114-W, 6 kardiölipin (CDL), 7 pöthpatidilkölin (POPC), 1 pöthpatidilgi̱lai̱thɛrɔl (POPG) kɛnɛ 29 β-DDM möli̱ki̱öli̱ kɛn cua kɛ da̱a̱k kɛnɛ ɣöö cua kɛ mödɛli̱ rɛydɛ 6 CDLni̱, 24 POPCni̱, 2 POβDMni̱ kɛnɛ 12. RC-LH116(Thok 5, A kɛnɛ B). Rɛy i̱thtra̱kciɛri̱ ti̱ti̱ rɛw, CDL cuɛ thia̱k kɛ ta̱a̱dɛ kä thai̱töpla̱thmik kui̱c kä kɔmpi̱lɛk, niɛ gua̱a̱ mɔ POPC, POPG kɛnɛ β-DDM kɛn ɛlɔ̱ŋ tekɛ kui̱c luminal. Lipid kɛnɛ di̱thɛrjɛn möli̱ki̱öli̱ rɛw cua kɛ woc rɛy αβ-1 ɛ wä kä αβ-6 ri̱jin duŋ RC-LH114-W kɔmpi̱lɛk (Pi̱guur 5A), kɛnɛ dhie̱e̱c cua kɛ woc rɛy ekui̱bɛlɛnt ri̱jin duŋ RC-LH116 (Pi̱guur 5B). Lipidni̱ ti̱ ŋuan cua kɛ jiek kui̱c in dɔ̱ŋ kä kɔmpi̱lɛk, ɛlɔ̱ŋ ɛ CDL, mi̱ ci̱ rɔ dol kam RC kɛnɛ αβ-7 ɛ wä kä αβ-13 (Pi̱guur 5, A kɛnɛ B). Lipidni̱ kɔ̱kiɛn tin ca riali̱kä i̱thtra̱kciɛrali̱ kɛnɛ di̱thɛrjɛni̱ kɛn tekɛ raar kä LH1 riŋ, kɛnɛ ɣöö athi̱l cɛɛnni̱ tin ca riali̱kä-ɛ gɔaa cukɛ räth kam LH1 tha̱buni̱ti̱ni̱, cua kɛ riali̱kä cie β-DDM rɛy RC-LH114-W, kɛnɛ ɣöö cua kɛ lat cie β-DDM rɛy RC A mi̱ ca li̱ɔɔm kɛ βPOPC-HDLDM kɛnɛ. Kä gua̱th tin cäät kä chelating lipidni̱ kɛnɛ di̱thɛrjɛni̱ rɛy i̱thtra̱kciɛrä dan nyothɛ jɛ i̱ kɛn kɛ pi̱thi̱ölöji̱kalli̱ ti̱ thi̱ääk kɛ gua̱th tin matkɛ (Pi̱guur S12A). Kä gua̱th tin te ekui̱bɛlɛnt möli̱ki̱öli̱ rɛy Tch bä tekɛ kɔni̱thtɛnci̱ mi̱ gɔa. Gɛntɛl kɛnɛ Trv. I̱thtrain 970 RC-LH1s (Pi̱guur S12, B ɛ wä kä E) (9, 12) kɛnɛ ɣai̱dröji̱n-bɔndiŋ rɛthi̱duëthni̱ nyin lipid ɣɛd buɔ̱n cuɛ nyoth i̱ gɔaɛ ɛlɔ̱ŋ rɛy thi̱kuɛnthi̱ ali̱gnmɛn (Pi̱guur S13), cuɛ nyoth i̱ Kɔnthɛrbɛciɔn CDL min ca rɔ mat kä RC (24), kɛn gua̱thni̱ ti̱ti̱ dɔ̱ŋ bi̱ kɛn kɔntherbɛciɔn-1.
(A kɛnɛ B) RC-LH114-W (A) kɛnɛ RC-LH116 (B) peptaidni̱ kɛn cuŋkɛ ɛ la kartuunni̱, kä pi̱gmɛni̱ cuŋkɛ ɛ la rodni̱, kɛ la̱tdɛ kɛɛ bi̱ɛɛl i̱thki̱ɛm rɛy Thurɛ 1. Lipidni̱ cua kɛ nyoth kɛ biɛl mi̱ lual, kä di̱thɛrjɛni̱ cua kɛ nyoth kɛ biɛl mi̱ tɔ̱c. UQ min ca yian kä RC QA kɛnɛ QB gua̱thni̱ ɛ mi̱ tɔ̱c, kä UQ min ca woc ɛ mi̱ tɔ̱c. (C kɛnɛ D) Guäcdiɛn ɛ cäät kɛ (A) kɛnɛ (B), kɛ lipidni̱ ti̱ ca woc. (E ɛ wä kä G) Guäcdɛ mi̱ di̱i̱t kä Q1(E), Q2(F) kɛnɛ Q3(G) ɛ bä kä RC-LH116, kɛ gëëk cëinni̱ tin gɛɛr rɔ̱ kärɔ̱. Kä ɣai̱dröji̱n bɔndni̱ cua kɛ nyoth ɛ la bëër ti̱ ca ŋuɔ̱k ti̱ bo̱o̱r.
Rɛy RC-LH116, kɛn RC QA kɛnɛ QB UQ, min te rɛy elɛkti̱rɔn tra̱ni̱thpɛr rɛy ca̱p dääkä ca̱rji̱, kɛn cua kɛ da̱a̱k rɛy gua̱thni̱ tin mat kɛn kɛ. Cieŋni̱ min, rɛy RC-LH114-W, QB kuinɔn /ka̱nɛ ni̱ riali̱kä kɛnɛ ɣöö ba lat kɛ pe̱kdɛ kɛɛliw piny. Ɛ matkɛ nɛmɛ thi̱n kä QA kɛnɛ QB kuinɔni̱, rɛw ti̱ ca kelɛted UQ möli̱ki̱öli̱ (tin te kam RC kɛnɛ LH1 riŋni̱) kɛn cua kɛ da̱a̱k rɛy RC-LH114-W i̱thtra̱kciɛr kɛ mëë ca lar ɛ buɔ̱n wecdiɛn mi̱ ca riali̱kä-ɛ gɔaa (tin te rɛy Q1 kɛnɛ Q2, kɛ̈l kɛ̈ɛ̈li̱). gua̱th mi lɔr). Thurɛ 5C). Ai̱thöprene yunitni̱ rɛw cua kɛ la̱th kä Q1, kɛnɛ ɣöö ɛn denthi̱ti̱ map cuɛ ai̱thöprene 10 ti̱ ci̱ thuɔ̱k riali̱kä kɛ jɔkdiɛn kä Q2. Rɛy i̱thtra̱kciɛrä duŋ RC-LH116, kɛn möli̱ki̱öli̱ diɔ̱k ti̱ ca kelɛted UQ10 (Q1 ɛ wä kä Q3, Thurɛ 5D) cua kɛ riali̱kä, kɛnɛ ɣöö möli̱ki̱öli̱ diaal cukɛ tekɛ denthi̱ti̱ mi̱ jɔc rɛy jua̱thdɛ kɛɛliw (Pi̱guur 5, D ɛ wä kä G). Rɛy i̱thtra̱kciɛri̱ rɛw, gua̱th tin te buɔ̱n wi̱c kuinɔn thi̱n kä Q1 kɛnɛ Q2 tekɛ mi̱ gɔa ɛlɔ̱ŋ mi̱ cuŋ (Pi̱guur S12F), kɛnɛ ɣöö kɛn cukɛ röm kärɔ̱ kɛ RC. Q1 jɛn tëkä thok W gap duŋ RC-LH114-W (Pi̱guur 1G kɛnɛ 5, C, D kɛnɛ E), kä Q2 jɛn tëkä gua̱a̱th in ca QB mat thi̱n (Pi̱guur 5, C, D) kɛnɛ F). Kä kɔntherbɛd L-Trp143 kɛnɛ L-Trp269 rɛthi̱duëli̱ kɛn thi̱ääk kɛn ɛlɔ̱ŋ kɛ Q1 kɛnɛ Q2 kɛnɛ ɣöö ŋunkɛ buɔ̱m π-i̱thtɛkiŋ interɛkcini̱ (Pi̱guur 5, E kɛnɛ F, kɛnɛ Pi̱guur S12). L-Gln88, 3.0 Å kä di̱thtal ɣɔkdhi̱ji̱n duŋ Q1, la ŋunɛ ɣai̱dröji̱n bɔn mi̱ bum (Pi̱guur 5E); rɛthi̱duë ɛmɛ ɛ mi̱ ca tɔ̱w rɛy RCni̱ diaal ɛ thiɛlɛ mi̱ ca mat thi̱n mi̱ na̱n ɛlɔ̱ŋ (Pi̱guur S13). L-Ser91 ɛ mi̱ la gɛɛrɛ Thr rɛy RCni̱ kɔ̱kiɛn (Pi̱guur S13), ɛ 3.8 Angthti̱rɔmni̱ mi̱ bä kä methyl ɣɔkdhi̱ji̱n duŋ Q1, kɛnɛ ɣöö dɔ̱ŋ bɛ ɣai̱dröji̱n bɔnd mi̱ kɔ̱c nööŋ (Pi̱guur 5E). Q3 /cɛ jɔc ɛ la mi̱ ci̱ rɔ mat kɛ jɛ, duŋni̱ ɣöö jɛn tëë rɛy ɣai̱dröpɔbik ri̱jin kam RC-M tha̱buni̱t kɛnɛ LH1-α tha̱buni̱t 5 ɛ wä kä 6 (Pi̱guur 5, D kɛnɛ G). Q1, Q2 kɛnɛ Q3 kiɛ kelɛted kuinɔni̱ tin thi̱ääk cua kɛ riali̱kä bä rɛy Tch. Kä pɛ̈th, Trv. I̱thtrain 970 kɛnɛ Blc. Kä iri̱th i̱thtra̱kciɛr (9, 10, 12) cuɛ nyothni̱ gua̱a̱th in ca tɔ̱w thi̱n min ca mat kɛɛl rɛy RC-LH1 kɔmpi̱lɛk (Pi̱guur S12G). Kä UQni̱ dhie̱e̱c tëë ci̱ däk piny rɛy RC-LH116 kɛn cukɛ mat ɛ gɔaa kɛ 5.8±0.7 kä kɔmpi̱lɛk kɛl min ca jiek ɛ li̱kuid krömatögra̱pi̱ mi̱ lät ɛlɔ̱ŋ (HPLC), niɛ gua̱a̱ mɔ kɛn UQni̱ diɔ̱k tëë ci̱ däk piny rɛy RC-LH114-W kɛn kuiyni̱ kɛn kä Kä thëm ba̱li̱ö duŋ 6.2±0.3 kä SQ are duɔ̱r.
Kä thuedö-thi̱mɛtrik L kɛnɛ M pöli̱peptaidni̱ kɛl kɛɛli̱ tëkɛ TMHni̱ dhie̱e̱c kɛnɛ ɣöö bɛ cu nööŋni̱ ɣe̱ti̱rödai̱mer min mat BChl di̱mer kɛl, BChl mönömɛri̱ rɛw, baktëri̱öpɛg (BPh) mönömɛri̱ rɛw, kɛnɛ nɔ̱n-Ɣem ɣai̱rɔn kɛl kɛnɛ UQ10 möli̱ki̱öli̱ kɛl kiɛ rɛw. Kɛ ta̱a̱ ɣaydrɔji̱n bɔndni̱ kä tɛrmi̱nal ketɔn gurup kɛnɛ min ŋa̱ckɛ i̱ cɛ rɔ dol rɛy Rps, karɔtinɔidni̱ laa kɛ laa matkɛ rɛy M-thabuni̱t, min cɔali̱ cis-3,4-deɣaidrɔrɣɔdɔpin. I̱thpethi̱thni̱ (25). Kä membi̱ran dɔmiɛn in te raar duŋ RC-H ɛ mi̱ ca yian kä membi̱ran ɛ TMH kɛl. Kä RC i̱thtra̱kciɛr kɛɛliw cuɛ ca̱a̱t kɛ tha̱buni̱ti̱ni̱ RC diɔ̱k nyin i̱thpethi̱thni̱ ti̱ thi̱ääk (cie mi̱ cie Rba). i̱thpi̱e̱röidni̱(PDB ID: 3I4D). Kä makröthai̱kali̱ duŋ BChl kɛnɛ BPh, kä karotinöid jɔak kɛnɛ nɔ̱n-ɣi̱m ɣai̱rɔn cukɛ rɔ̱ mat rɛydɛ ɛn rethölucin rɛnji̱ duŋ i̱thtra̱kciɛri̱ ti̱ti̱, cie min la̱tkɛ ɛ buɔ̱n wec UQ10 kä QA tha̱yt kɛnɛ QB kuinɔn kä RC-LH116 (Pi̱guur S15).
Kä ta̱a̱ RC i̱thtra̱kciɛri̱ rɛw ti̱ tekɛ QB tha̱a̱ŋ gua̱thni̱ ti̱ gööl cuɛ ŋuni̱ gua̱a̱th mi̱ ji̱di̱t kɛ thëm kä min la gɛɛrɔ kä kɔnpörmecinal min wä kɛɛl kɛ QB kuinɔn baindiŋ. Rɛy RC-LH116 kɔmpi̱lɛk, QB kuinɔn jɛn të rɛy gua̱th in ca yian kɛɛliw "prödhi̱mal" (26), duŋni̱ ɣöö dääk duŋ RC-LH114-W thiɛlɛ QB kuinɔn. /Thiɛlɛ QB kuinɔn rɛy RC-LH114-W, min la ga̱a̱c kɛ ɣöö ɛn kɔmpi̱lɛk lätdɛ, ɛlɔ̱ŋ mi̱ läny RC-LH116 kɔmpi̱lɛk kɛ i̱thtra̱kciɛrali̱ min ca riali̱kä QB kuinɔn. Cieŋni̱ min kɛn LH1 riŋni̱ rɛw cukɛ chelate kɛ kui̱ kuinöni̱ bäkɛl, dhie̱e̱c kɛn cua kɛ riali̱kä i̱thtra̱kciɛralli̱ rɛy riŋä RC-LH116 min ca gäk, niɛ gua̱a̱ mɔ cu diɔ̱k kärɔ̱ i̱thtra̱kciɛralli̱ tekɛ guut rɛy RC-LH114-W riŋä min ca lɛp. Nɛmɛ cuɛ rɔ re̱p kä i̱thtra̱kciɛral di̱thɔrderi̱ dɔ̱ŋ bɛ nyothni̱ gër RC-LH114-W QB gua̱thni̱ kɛ pɛ̈th, kuinɔn kinetikni̱ kɛ pɛ̈th rɛy kɔmpi̱lɛk, kɛnɛ rëpdɛ kɛ ɣöö bɛ LH1 lɔɔp gɔ̱k. Cu nɛy ɛ lar ɛn ɣöö thiɛl UQ rɛy RC QB gua̱a̱th duŋ RC-LH114-W dɔ̱ŋ bɛ ben raar kä kɔmpi̱lɛk mi̱ di̱i̱t kɛnɛ kɔmpi̱lɛk mi̱ lät ɛlɔ̱ŋ, kɛnɛ ɣöö ɛn QB gua̱a̱th duŋ RC-LH114-W cua mi̱ ca ŋok kɛ pɛ̈th rɛy UQ turnöber Kä gua̱a̱th in ca lɛy (kä thok QB gua̱a̱thdɛ cua gäk kä kɔnpuɔrmɛciɔn a) ref.
Mi̱ thiɛlɛ QB, ɛn rötɛciɔn in wä kɛɛl kɛ L-Phe217 ɛ wä kä gua̱a̱th in /ci̱ rɔ lot kɛ UQ10 min matdɛ, kɛ ɣöö jɛn bɛ cu nööŋni̱ ɣöö bi̱kɛ röm kɛ ai̱thöpren yunit in nhiam kä jua̱th (Pi̱guur 6A). Ɛ nyɔk bä, min jɔc kä gër kɔnpörmecinal min jɔc ɛ jɔc, ɛlɔ̱ŋ ɛ ɣeli̱k de (ɣeli̱k mi̱ ciɛk rɛy lɔɔp kam TMH D kɛnɛ E) gua̱th in bi̱ L-Phe217 rɔ ri̱t kä QB baindiŋ pɔkɛt kɛnɛ rötɛciɔn duŋ L-Tyr223 (Pi̱guur 6A) kɛ däk ɣai̱dröji̱n bɔndiŋ duŋ QB baindiŋ framework kɛnɛ min la M-5. gua̱a̱thdɛ (Thurɛ 6B). Ɣeli̱k de pi̱bötni̱ kä bɛthdɛ, kä Cα duŋ L-Ther209 ɛ mi̱ ca gɛr ɛ 0.33Å, niɛ gua̱a̱ mɔ ɛn L-Bal221Cα ɛ mi̱ ca gɛr ɛ 3.52Å. /Thiɛlɛ mi̱ ca guic mi̱ ci̱ rɔ gɛr rɛy TMH D kɛnɛ E, min la la̱thkɛ gua̱a̱th kɛl rɛy i̱thtra̱kciɛri̱ da̱ŋ rɛw (Pi̱guur 6A). Cätkɛ min ŋäc kɔnɛ jɛ, nɛmɛ ɛ jɛn i̱thtra̱kciɛr in nhiam rɛy näci̱ral RC min gäk gua̱a̱th QB. Ɛn pääri̱dɛ kɛ kɔmpi̱lɛt (QB-baund) i̱thtra̱kciɛr nyothɛ jɛ i̱ ɛ ŋot kuinɔn /kenɛ ni̱ kuɛ̈ɛ̈, ɛn kɔnpörmecinal gër bɛ go̱ri̱ ɣöö bɛ wä rɛy kuinɔn. L-Phe217 laa rɔ laa wil kɛ ɣöö bɛ ku lɛ tä kɛ π-i̱thtɛkiŋ mi̱ ci̱ rɔ mat kɛ buɔ̱n kuinɔn in tä wi̱i̱dɛ, kä ɛn ɣeli̱k bɛ rɔ riet raar, bɛ ku lɛ wɔ̱ raar, bɛ cɔ̱w L-Gly222 kɛnɛ thɛydɛ cɛɛn L-Tyr223 jakä bi̱ tä kɛ ɣaydrɔji̱n bɔn mi̱ tä kɛɛ ɣaydrɔji̱n bɔn mi̱ tä thi̱n (Pi̱guur 6, A kɛnɛ C).
(A) Kartuun mi̱ ca la̱th piny kä ɣölögra̱m(L cɛɛn, örɛny/M cɛɛn, magenta) kɛnɛ apö(gi̱rɛy) i̱thtra̱kciɛr, min bi̱ key ri̱thi̱duëli̱ cua kɛ nyoth rɛy ta̱a̱ mi̱ ce̱tkɛ rod-cie mi̱ cuŋ ɛ la rod. UQ10 ɛ mi̱ cuŋ ɛ la bar mi̱ tɔ̱c. Kä dotted line nyothɛ ni̱ ɣai̱dröji̱n bɔnni̱ tin ci̱ tuɔɔk rɛy i̱thtra̱kciɛrä kɛɛliw. (B kɛnɛ C) Kä gua̱a̱th in cuŋɛ la apöli̱pöprötien kɛnɛ riŋ i̱thtra̱kciɛr kɛɛliw, nyothɛ tha̱a̱ŋ cɛɛn ɣɔkdhi̱ji̱n duŋ L-Phe217 rɛy mi̱lual kɛnɛ L-Tyr223 rɛy mi̱lual, kɛ̈l kɛ̈ɛ̈li̱. Kä L tha̱buni̱t ɛ örɛny; kä M kɛnɛ H tha̱buni̱ti̱ni̱ /ci̱kɛ bi̱ɛɛl. (D kɛnɛ E) Apöli̱pöprötien (D) kɛnɛ kɛɛliw (E) RC QB gua̱thni̱ [biɛl ɛ (A) kɛ̈l kɛ̈ɛ̈li̱] kɛnɛ Thermöpi̱la̱th thermöpi̱la̱th PSII (mi̱ tɔ̱c, mi̱ yie̱l kɛ pla̱thtik kuinɔn; PDB ID: 3WU2) Align (58).
Ɛ /ka̱nɛ lip, cieŋni̱ min i̱thtra̱kciɛri̱ ti̱ ŋuan nyin QB-depi̱ciɛn RCni̱ ti̱ thiɛl LH1 kɛn tekɛ thi̱n, kä kɔnpörmecinal min ci̱ rɔ gɛr rɛy ŋi̱i̱cä ɛmɛ /ka̱nɛ ni̱ lat ni̱ wän. Ti̱ti̱ cu määni̱ QB depleciɔn i̱thtra̱kciɛr mi̱ bä kä Blc. biri̱dith (PDB ID: 3PRC) (27), C. tɛpi̱dum (PDB ID: 1EYS) (28) kɛnɛ Rba. i̱thpai̱röidni̱ (PDB ID: 1OGV) (29), kɛndiaal cukɛ thia̱k kɛ päär kɛ ta̱a̱ QB i̱thtra̱kciɛrädiɛn kɛɛliw. Guäcdɛ min thi̱a̱k duŋ 3PRC cuɛ nyoth i̱ LDAO (Lauryl Dimethyl Amine Ɣɔkthaid) di̱thɛrjɛn möli̱ki̱öli̱ cukɛ rɔ̱ mat gua̱a̱th in wä QB thi̱n, min dɔ̱ŋ bɛ gaŋ ni̱ ɣöö ba nyɔk kɛ riali̱kä rɛy kä min ca gäk. Cieŋni̱ min LDAO /cɛ rɔ bi̱ däk piny gua̱a̱th mi̱ cäät rɛy 1EYS kiɛ 1OGV, kɛn RCni̱ ti̱ti̱ cua kɛ riali̱kä kɛ la̱tdɛ kɛɛ di̱thɛrjɛnt mi̱ cäät kɛ kui̱c ɛmɔ dɔ̱ŋ bɛ cu nööŋni̱ mi̱ cäät. Kä kri̱thtal i̱thtra̱kciɛr duŋ Rba. I̱thpi̱e̱röidɛth RC kö-kri̱thtali̱dhed kɛ thai̱tökrɔm c2 (PDB ID: 1L9B) bä cuɛ ce̱tkɛ mi̱ tekɛ gua̱a̱th mi̱ ca gäk kä QB. Cieŋni̱ min, rɛy kä nɛmɛ, ɛn N-terminal ri̱jin duŋ RC-M pöli̱pɛptaid (cuɛ röm kɛ QB baindiŋ thayt kɛ rɛy H bɔn duŋ Tyr rɛthi̱duë kä Q ɣeli̱dh) bɛ kɔnpörmecin mi̱ /ciɛɛ näci̱ral naŋ, kɛnɛ ɣöö ɛn QB kɔnpörmecinal min ci̱ rɔ gɛr /ka̱nɛ nyɔk kɛ guäc (30). Min jak naath kä bum ɛ jɛn ɣöö /ka̱nɛ nɛn ɛn ta̱a̱ ɛmɛ min ci̱ rɔ ri̱t kä M pöli̱peptaid rɛy RC-LH114-W i̱thtra̱kciɛr, min cuɛ thia̱k kɛ päär kɛ N-terminal ri̱jin duŋ RC-LH116 RC. Jɛn bä ba ŋa̱c i̱ kɛ kɔr kä mëë ca di̱thɛrjɛn-bɛth LH1 antenna woc, kä apöli̱pöprötien RCni̱ rɛy PDB cua kɛ riali̱kä, min cu intɛrnal kuinɔn puɔɔli̱ kɛnɛ lipidni̱ woc rɛy kam RC kɛnɛ inner thɔ̱rpëth min ca göl piny ɛ LH1 riŋ (31, 32). RC cuɛ ŋot lätdɛ kɛ ɣöö jɛn rɔmdɛ kɔpaktɔri̱ diaal, ɛ thiɛlɛ mi̱ ca da̱a̱k kä QB kuinɔn, min kuiy i̱thtɛbuɔl kɛnɛ ɣöö ni̱ ciaaŋ la bath rɛy la̱tdɛ (33). Ɛ nyɔk bä, jɛn ŋa̱c kɛ jɛ ɛn ɣöö wuɔ̱c LH1 kɛnɛ näci̱ral thärkäl lipidni̱ kä RC bɛ tekɛ mi̱ bɛ gɛr kä lät, ce̱tkɛ mi̱ cie mi̱ ci̱ tëkdɛ jakä ciɛk kä ca̱rji̱-thɛparated P+QB-i̱thtët (31, 34, 35). Kɛ kui̱c ɛmɔ, kɔn cua lat i̱ ta̱a̱ LH1 riŋä min te thi̱n min ci̱ RC göl piny dɔ̱ŋ bɛ gua̱a̱th QB min ca “gäk” rɔm thi̱n, kɛ kui̱c ɛmɔ bɛ gua̱a̱th in thia̱k kɛ QB gaŋ.
Cieŋni̱ min apöli̱pöprötien (mi̱ thiɛlɛ QB kuinɔn) kɛnɛ i̱thtra̱kciɛr in ci̱ thuɔ̱k cuŋɛ la i̱thnapthɔ̱tni̱ rɛw kärɔ̱ kä min ci̱ rɔ ri̱t kä QB thayt, ni̱ ɣöö bɛ tekɛ ti̱ ŋuan ti̱ ci̱ tuɔɔk, tëkɛ ti̱ nyoothɛ ɛn ɣöö min ca mat dɔ̱ŋ ba cu gaŋ kɛ ɣöö bɛ rɔ nyɔk kɛ ma̱t ɛ ɣai̱drökuinɔn kɛ ga̱ŋ thɔ̱bi̱thtɛt ini̱bi̱ciɔn. Kä röm kuinölöl kɛnɛ kuinɔn thi̱ääkä QB thayt duŋ apöli̱pöprötien dɔ̱ŋ bɛ tekɛ dääk, min bi̱ nööŋni̱ ɣöö ba lo̱k ɛ RC. Jɛn cua lat kɛ gua̱a̱ mi̱ bäär i̱ min gɛɛrɔ kä kɔnpörmecinal tëkɛ luäŋ rɛy matdä kɛnɛ jak kuinöni̱ kä kuiy. Kä lua̱ŋ RCni̱ tin ci̱ kɔ̱c kɛ jak kuinöni̱ kä kuiy kɛ kɔr ada̱ptɛciɔn mi̱ col cɛ jiääk (36); X-rɛy kri̱thtɛllögra̱pi̱ cuɛ nyoth i̱ min ci̱ ji̱ääk ɛmɛ bëë kä QB kuinöni̱ min ca yian rɛy "di̱thtal" kɔnpörmecin kɛ kui̱ 4.5 Å ɛ jiɛn kä ɣɛktib prödhi̱mal pöthi̱ciɔn (26) , 37). Cu nɛy ɛ lar ɛn ɣöö di̱thtal baindiŋ kɔnpörmecin ɛmɛ ɛ i̱thnapthɔ̱t duŋ wec in te däär kam apöli̱pöprötien kɛnɛ riŋ i̱thtra̱kciɛr kɛɛliw, min guur ini̱cial interɛkciɔn kɛ kuinɔn kɛnɛ lɛpdɛ kɛɛ QB thayt.
Kä ta̱a̱ II RC min ca jiek rɛy PSII kɔmpi̱lɛk duŋ tha̱a̱ŋ pötötröpik baktëria kɛnɛ thai̱anöbaktëria, algëë kɛnɛ jiɛn tekɛ i̱thtra̱kciɛral kɛnɛ pa̱ŋcinal kɔntherbɛciɔn (38). Kä i̱thtra̱kciɛral ali̱gnmɛn min ca nyoth rɛy Thurɛ 6 (D kɛnɛ E) cuɛ guic ni̱ min cäät kam PSII RCni̱ kɛnɛ QB gua̱a̱th in te baktëria RC kɔmpi̱lɛk thi̱n. Päär ɛmɛ cuɛ te thi̱n kɛ gua̱a̱ mi̱ bäär ɛ la mödɛl kɛ kui̱ ŋi̱i̱cä thi̱thtɛmni̱ tin thi̱ääk kä kuinɔn baindiŋ kɛnɛ min jak jɛ kä kuiy. Publi̱këcini̱ tëë nhiam cua lari̱ min gɛɛrɔ kä kɔnpörmecinal cuɛ wä kɛɛl kɛ PSII min jak kuinöni̱ kä kuiy (39, 40). Kɛ kui̱c ɛmɔ, mi̱ ca guic ɛ eboluciɔneri̱ kɔntherbɛciɔn duŋ RC, nɛmɛ mëë /ka̱n guic ni̱ wän ɛn baindiŋ mekani̱dhi̱öm dɔ̱ŋ bɛ lät bä kä QB tha̱yt duŋ PSII RC rɛy ɣɔkdhi̱jenɛted pötötröpik pi̱lani̱.
Rps ΔpufW (pufW mi̱ /ka̱n lɛbeli̱d woc) kɛnɛ PufW-Ɣi̱th (C-terminal 10x Ɣi̱th-tagged prötien-W mi̱ ca nyoth kä näci̱ral pufW löka̱th) i̱thtrainni̱. palustrith CGA009 cua lat rɛy la̱tda ëë nhiam (16). I̱thtrainni̱ ti̱ti̱ kɛnɛ ai̱thöjenik wild-taap parent cua kɛ jiek kä ri̱jiɛr ɛ thɛm kɛ nämbär mi̱ tɔt kä thëlli̱ kä PYE (kɛl 5 g liter -1) (tɔ̱a̱wkɛ rɛy LB kä -80 °C, min tekɛ 50% (w/v) gi̱lai̱thɛrɔl) prötien, yi̱th ɣɛktra̱k kɛnɛ thucinat% pla/v. Kä plati̱ cua inkubɛted kɛ wäär rɛy muɔ̱th kä lëth duëël piny anaerobik kɔndi̱ciɔni̱, kɛnɛ ɣöö kɛ kɔrɛ cua buaydɛ buay kɛ buay mi̱ bo̱r (~50 μmolm-2 s-1) mëë cua ŋun ɛ OSRAM 116-W ɣalöji̱n bulbni̱ (RS Kɔmpönɛni̱, UK) kɛ ni̱n 3 ɛ wä kä 5 amääni̱ mëë ci̱ kölöni̱ kɛl jɔɔc. Ɛn thi̱ŋgil kölöni̱ cua la̱t kɛ inökulate 10 ml duŋ M22+ mëdiöm (41) cua mat kɛɛ 0.1% (w/v) kathaminö athi̱dni̱ (kɛ kɔrɛ ba cu cɔl i̱ M22). Kä ka̱lciɛr cua pith piny gua̱th mi̱ kuiy ɣɔkdhi̱ji̱n thi̱n rɛy muɔ̱th kä 34°C kɛ lëthdɛ kɛɛ 180 rpm kɛ thaakni̱ ti̱ 48, kɛ kɔrɛ cua 70 ml duŋ ka̱lciɛr inökulated piny gua̱th mi̱ cäät kɛ thaakni̱ ti̱ 24. Ɛ themi-aeröbik ka̱lciɛr kɛ bɔli̱öm duŋ 1 ml ɛ mi̱ la̱tkɛ kɛ inokulɛciɔn 30 ml duŋ M22 mëdiöm rɛy 30 ml yuni̱bertha̱l i̱thki̱ru-tɔp tra̱ni̱thparent gi̱laath buɔ̱l kɛnɛ i̱rradiated kɛ agi̱tɛciɔn (~50μmolm-2 s-1) kɛ thaakni̱ ti̱ 48 ɛ i̱thteri̱l magnɛtik puɔɔth I̱thtirriŋ rod. Kɔrɛ 30 ml kä ka̱lciɛr cua inökulated kɛ pek mi̱ cie 1 li̱ti̱r duŋ ka̱lciɛr rɛy gua̱th mi̱ cäät, min kɛ kɔrɛ cua la̱t kɛ inokulated kɛ pek mi̱ cie 9 li̱ti̱ri̱ duŋ ka̱lciɛr mi̱ ca buay kä ~200 μmolm-2 s-1 kɛ thaakni̱ ti̱ 72. Kä thëlli̱ cua kɛ ŋɛɛr ɛ thɛnti̱ri̱pugɛciɔn kä 7132 RCF kɛ minitni̱ ti̱ 30, cua kɛ nyɔk kɛ thɔ̱thpɛndiŋ rɛy ~10 ml duŋ 20 mM tri̱th-HCl (pH 8.0), kɛnɛ ɣöö cua kɛ tɔ̱w kä -20°C amääni̱ mëë ca go̱r.
Kɛ kɔr kä mëë ci̱kɛ kööt, matdɛ tha̱a̱ŋ kri̱thtali̱ duŋ deɔkthai̱ri̱böni̱kli̱eth I (Merk, UK), lai̱thödhaim (Merk, UK) kɛnɛ Röche ɣölöendhaim prötieath ini̱bi̱tɔr tablɛtni̱ rɛw (Merk, UK) kä thëlli̱ tin ca nyɔk kɛ thɔ̱thpɛndid. Rɛy 20,000 psi Pi̱rɛɛny pi̱rɛjɛr thëll (Aminkö, USA), kɛn thëlli̱ cua kɛ ya̱r ni̱ kä 8 ɛ wä kä 12. Kɛ kɔr kä mëë ca thëlli̱ tin /ka̱n tiath woc kɛnɛ tin ci̱ duɔth tin /ci̱ rɔ̱ luäŋ kɛ li̱ööm ɛ thɛnti̱ri̱pugɛciɔn kä 18,500 RCF kɛ minitni̱ 15 kä 4°C, ɛn membi̱ran cua woc kä pi̱gmɛnted lai̱thɛt ɛ thɛnti̱ri̱pugɛciɔn kä 113,000 RCF kɛ thaakni̱ 2 kä 43,000°C. La̱tdɛ thɔ̱lubɔl pi̱rɛkcin raar kɛnɛ ɣöö bɛ membi̱ran in ca biɛl nyɔk kɛ la̱th rɛy 100 ɛ wä kä 200 ml duŋ 20 mM tri̱th-HCl (pH 8.0) kɛnɛ ɣömöjenaidhe amääni̱ mi̱ thiɛlɛ aggregɛtni̱ ti̱ jɔc. Kä membɛrɛn ëë ca ŋok cua inkubɛted rɛy 20 mM tri̱th-HCl (pH 8.0) (Anatrace, USA) min te 2% (w/v) β-DDM kɛ thaak 1 rɛy muɔ̱th kä 4°C kɛ lëthdɛ mi̱ tɔt. Kɛ kɔrɛ cua thɛnti̱ri̱puɔɔg kä 70°C kɛ wuɔ̱c 150,000 RCF kä 4°C kɛ thaak 1 kɛ wuɔ̱c kä tin ci̱ duɔth tin /ci̱ li̱ööm.
Kä thɔ̱lubi̱laidhiŋ membi̱ran mi̱ bä kä ΔpufW i̱thtrain cua la̱th kä 50 ml DEAE Theparöth ayɔn ɛkci̱ɛnji̱ kɔlöm kɛ kɔlömni̱ diɔ̱k (CV) duŋ baindiŋ bupper [20 mM tri̱th-HCl (pH 8.0) min tekɛ 0.03% (w/v) β-DDM]. Lak kɔlöm kɛ CV baindiŋ bupperi̱ rɛw, kɛ kɔrɛ lak kɔlöm kɛ baindiŋ bupperi̱ rɛw tin tekɛ 50 mM NaCl. Kä RC-LH116 kɔmpi̱lɛk cua eluted kɛ li̱ni̱e̱e̱r gi̱rɛdiɛn duŋ 150 ɛ wä kä 300 mM NaCl (rɛy baindiŋ bupper) kä 1.75 CV, kɛnɛ ɣöö cua baindiŋ kɔmpi̱lɛk ëë ci̱ duɔth eluted kɛ baindiŋ bupper min te 300 mM NaCl kä 0.5 CV. Ruuli̱ abdhɔ̱pciɔn i̱thpekti̱ra̱m kam 250 kɛnɛ 1000 nm, titdɛ pi̱rɛkcin kɛ abdhɔ̱pciɔn rɛci̱ö (A880/A280) mi̱ di̱tni̱ jɛn kä 1 kä 880 ɛ wä kä 280 nm, jakdɛ kä kuiy ni̱ kä rɛɛw rɛy baindiŋ bupper, kɛnɛ ɣöö lätdɛ kɛɛ pröciɛr mi̱ cäät ɛ nyɔk kä DEAE kɔlöm Kä puri̱pi̱këcin. Dilute pi̱rɛkcini̱ kɛ A880/A280 rɛci̱öni̱ ti̱ di̱tni̱ kɛn kä 1.7 kɛnɛ A880/A805 rɛci̱öni̱ ti̱ di̱tni̱ kɛn kä 3.0, la̱tdɛ ro̱und in diɔ̱ɔ̱kdiɛn kä ai̱ön ɣɛkci̱ɛnji̱, kɛnɛ rɔm pi̱rɛkcini̱ kɛ A880/A280 rɛci̱öni̱ ti̱ di̱tni̱ kɛn kä 2.2 kɛnɛ A880/A805 rɛci̱öni̱ ti̱ di̱tni̱ kɛn kä0. Kä tha̱a̱ŋdɛ cua kɔmpi̱lɛk mi̱ ca riali̱kä cua mat ɛ wä kä ~2 ml rɛy Amikɔn 100,000 möli̱ki̱öl thiɛkdɛ cua ŋok-ɣɔp (MWCO) thɛnti̱ri̱pugal pi̱li̱tɛr (Merk, UK), kɛnɛ ɣöö cua la̱th kä Thuperdɛk 200 16/600 di̱tdɛ min ca woc kä kɔlöm (GE Ɣelthkɛr, US) min tekɛ Napper the m 1.5 Ci̱b. Ruuli̱ abdhɔ̱pciɔn i̱thpekti̱ra duŋ di̱tdɛ min ca woc pi̱rɛkciɔn, kɛnɛ ɣöö ba abdhɔ̱pciɔn i̱thpekti̱ra kɔncentrɛt kɛ A880/A280 rɛci̱öni̱ ti̱ läny 2.4 kɛnɛ A880/A805 rɛci̱öni̱ ti̱ läny 5.8 ɛ wä kä 100 A880, kɛnɛ ɣöö kɛ pɛ̈th lät kɛn kɛ kɛ kui̱ krayö-TEM gi̱ri̱d riali̱dɛ i̱kä kiɛ tɔ̱wdɛ mi̱ görkɛ kä -880°.
Kä thɔ̱lubi̱lai̱dhiŋ membi̱ran mi̱ bä kä PufW-Ɣi̱th i̱thtrain cua la̱th kä 20 ml Ɣi̱thPrep FF Ni-NTA Theparöth kɔlöm (20 mM tri̱th-HCl (pH 8.0) min te 200 mM NaCl kɛnɛ 0.03% (w/w)) rɛy Ɣelth IMcare (GE). v) β-DDM]. Kä kɔlöm cua lak kɛ CVni̱ dhie̱e̱c nyin IMAC bupper, kɛ kɔrɛ cua kɛ lak kɛ CVni̱ dhie̱e̱c nyin IMAC bupper min tekɛ 10 mM ɣi̱thtidin. Kä kɔɔr kɔmpi̱lɛk cua woc kä kɔlöm kɛ IMAC bupperi̱ dhie̱e̱c ti̱ tekɛ 100 mM ɣi̱thtidin. Kä pi̱rɛkcin min tekɛ RC-LH114-W kɔmpi̱lɛk ɛ mi̱ ca thi̱ääŋ ɛ wä kä ~10 ml rɛy tankä mi̱ ca liɔm mi̱ ca riali̱kä kɛ Amikɔn 100,000 MWCO pi̱li̱tɛr (Merck, UK), cua jakä kuiy ni̱ kä 20 kɛ baindiŋ bupper, kɛnɛ ɣöö kɛ kɔrɛ cua mat kä 25 ml rɛy DEAE Thepaur kɛ kɛ nhiam. Lak kɔlöm kɛ CV baindiŋ bupperi̱ da̱ŋ ŋuaan, kɛ kɔrɛ ba kɔmpi̱lɛk elute kä CVni̱ bädäk kä li̱ni̱e̱e̱r gi̱rɛdiɛn duŋ 0 ɛ wä kä 100 mM NaCl (rɛy baindiŋ bupper), kɛnɛ ɣöö kɛn CVni̱ da̱ŋ ŋuaan tin ci̱ duɔth tekɛ 100 mM baindiŋ bupper Kä rɛthi̱dual kɔmpi̱lɛkni̱ klöbin rɛci̱öm20. mi̱ di̱tni̱ jɛn kä 2.4 kɛnɛ A880/A805 rɛci̱ö mi̱ di̱tni̱ jɛn kä 4.6 pi̱rɛkcini̱ cua kɛ mat kɛɛl ɛ wä kä ~2 ml rɛy Amikɔn 100,000 MWCO thɛnti̱ri̱pugal pi̱li̱tɛr, kɛnɛ ɣöö cua kɛ thiäŋ kɛ 1.5 CV IMAC rɛy adbanth Bupper ekui̱li̱brɛted Thuperdɛk 200 thi̱pperlume kɛnɛ ɣɛkludhe 1.5 Ci̱b. Ruuli̱ abdhɔ̱pciɔn i̱thpekti̱ra duŋ di̱tdä-ɛkkluciɔn pi̱rɛkcini̱ kɛnɛ ɣöö ba abdhɔ̱pciɔn i̱thpekti̱ra mat kɛɛl kɛ A880/A280 rɛci̱öni̱ ti̱ läny 2.1 kɛnɛ A880/A805 rɛci̱öni̱ ti̱ läny 4.6 ɛ wä kä 100 A880, min cua la̱t kɛ pɛ̈th kɛ riali̱kä TEM gi̱ri̱d mi̱ ca kɔ̱c kiɛ tɔ̱wdɛ amääni̱ -80.
Ɛ Leica EM GP immerciɔn pri̱dhɛr cua la̱t kɛ riali̱ lëthä mi̱ tɔt i̱kä TEM gridni̱. Kä kɔmpi̱lɛk cua jakä kuiy rɛy IMAC bupper ɛ wä kä A880 duŋ 50, kɛnɛ ɣöö kɛ kɔrɛ cua 5μl la̱th wi̱i̱ mi̱ pay buay-mi̱ ca woc KUANTIPÖIL 1.2/1.3 karbön-kɔted kɔpper mɛth (Agar Thaanytipik, UK). Inkubɛt gi̱ri̱d kä 20°C kɛnɛ 60% ri̱lɛtib ɣumidi̱ti̱ kɛ 30 s, kɛ kɔrɛ ba cu kööt kɛ 3 s, kɛ kɔrɛ ba cu woc rɛy li̱kuid ethaan kä -176°C.
Kä data ni̱ nyin RC-LH114-W kɔmpi̱lɛk cua kɛ ri̱kɔrdi̱d kä eBIC (Elɛkto̱nik Baöimajiŋ Thäntɛr) (Bri̱ti̱c Dai̱mɔn Lait Thuɔ̱rth) kɛ Titan Kriöth mai̱kröthkɔɔp, min lät kä pɛ̈th bɔltɛj duŋ e 300kV, kɛ nɔminal magni̱pi̱këcin duŋ 130,000 duŋ gap-V kɛnɛ. Ɛ Gatan 968 GIF Kuanta̱m kɛ K2 pi̱i̱k detektɔr cua la̱t kɛ ri̱kɔrdi̱ thurɛni̱ rɛy kuën mödɛlä kɛ ruuli̱ data ni̱. Kä kali̱brɛted pi̱dhɛl di̱tdɛ ɛ 1.048Å, kɛnɛ ɣöö ɛn dɔ̱th rɛt ɛ 3.83 e-Å-2s-1. Cuɛ muubi ɛmɔ ruɔ̱ɔ̱l kɛ thɛkɔndi̱ni̱ da̱ŋ 11 kä cuɛ jɛ da̱a̱k kä gua̱th ti̱ 40. La̱tdɛ gua̱a̱th in ca karbön-kɔted kɛ locdɛ kä mai̱kröthkɔɔp, kɛ kɔrɛ bɛ mubi̱ni̱ diɔ̱k ruuli̱ kä puɔ̱l kɛl. Rɛydɛ kɛɛliw, cua mubi̱ni̱ ti̱ 3130 ruuli̱, kɛ depöka̱th ba̱liömmi̱ kam -1 kɛnɛ -3μm.
Kä data ni̱ kɛ kui̱ RC-LH116 kɔmpi̱lɛk cua kɛ ruuli̱ kɛ la̱tdɛ kɛɛ mai̱kröthkɔɔp mi̱ cäät kä Athterburi̱ Baöthtra̱kciɛr Laböratöri̱ (Yuni̱berthi̱ti̱ duŋ Leeds, UK). Kä data ni̱ cua kɛ ruuli̱ rɛy kuën mödɛlä kɛ magni̱pi̱këcin duŋ 130 k, kɛnɛ ɣöö cua pek pi̱dhɛl kali̱brɛt ɛ wä kä 1.065 Å kɛ dɔ̱th duŋ 4.6 e-Å-2s-1. Ɛn muubi ɛmɔ caa jɛ la̱th rɛy thɛkɔndi̱ni̱ da̱ŋ 12 kä cua jɛ da̱a̱k kä gua̱th ti̱ 48. Rɛy matdädiɛn, cua pilimni̱ ti̱ 3359 ruuli̱, kɛ depöka̱th ba̱liömmi̱ kam -1 kɛnɛ -3μm.
Data ni̱ diaal tin la̱tkɛ rɛy Relion 3.0 paiplaan (42). La̱tdɛ Motioncorr 2 (43) kɛ riali̱ bi̱i̱mä i̱kä kɛ thëm thiɛkdɛ, kɛ kɔrɛ lätdɛ CTFFIND 4.1 (44) kɛ jiek CTF (kɔni̱thtra̱th tra̱ni̱thpɛr pa̱ŋciɔn) parami̱ti̱r. Tipikal pötömai̱krögra̱pni̱ kɛ kɔr kä ti̱ti̱ cua kɛ tok kɛ la̱t cua kɛ nyoth rɛy Thurɛ 2. S16. Kä autömatik thɛlɛkciɔn tɛmpi̱lɛt ɛ mi̱ ca nööŋ ɛ manuali̱ thɛlɛkciɔn mi̱ cie 250 pi̱dhi̱li̱ kä 1000 pa̱rti̱kal rɛy 250-pi̱dhi̱li̱ prɛm kɛnɛ ɣöö thiɛlɛ repi̱rɛn rɛw-dai̱mɛncinali̱ (2D) ki̱la̱ththi̱pi̱këcin, kɛ kui̱c ɛmɔ lo̱k ki̱la̱ththi̱pi̱këcini̱ tin ci̱ röm kɛ tha̱mpuɔl kɔntaminaciɔn kiɛ thiɛlɛ ciɛŋ ti̱ ŋa̱ckɛ. Kɛ kɔrɛ, cua thɛlɛkciɔn mi̱ la̱tkɛ kärɔa la̱t kä mai̱kröpötögra̱pni̱ diaal, kɛnɛ ɣöö ɛn RC-LH114-W cuɛ tekɛ 849,359 parti̱kali̱, kɛnɛ ɣöö ɛn RC-LH116 kɔmpi̱lɛk cuɛ tekɛ 476,547 parti̱kali̱. Kɛn parti̱kali̱ diaal tin ca kuany cua kɛ wä rɛy ro̱undni̱ rɛw kä nɔ̱n-repi̱rɛn 2D ki̱la̱ththi̱pi̱këcin, kɛnɛ ɣöö kɛ kɔr kä mëë ci̱kɛ jäl kɛl, kɛn parti̱kali̱ tin ci̱ röm kɛ karbön area, tha̱mpuɔl kɔnta̱minɛciɔn, thiɛlɛ mi̱ jɔc mi̱ nyoothɛ kiɛ parti̱kali̱ ti̱ bum ti̱ ci̱ rɔ̱ mat kɛɛl cua kɛ lo̱k, cuɛ ben raar ɛ la 772,033 (90.9%) kɛnɛ 359,578% duŋ ki̱la̱ththi̱pi̱këcin (Parti̱kalä)d. RC-LƔ114-W kɛnɛ RC-LƔ116 kɛ̈l kɛ̈ɛ̈li̱. Kä ini̱cial 3D repi̱rɛn mödɛl cua jiek kɛ la̱tdɛ kɛɛ i̱thtɔka̱thtik gi̱rɛdiɛn di̱thɛn methɔd. Mi̱ la̱tkɛ ini̱cial mödɛl cie mi̱ ɛ repi̱rɛn, kɛn parti̱kali̱ tin ca kuany kɛn cua kɛ da̱a̱k rɛy buni̱ ŋuaan rɛy 3D. Mi̱ la̱tkɛ mödɛl rɛy bunä nɛmɛ cie mi̱ ɛ repi̱rɛn, la̱tdɛ 3D ri̱pi̱ni̱ŋ kä pa̱rti̱käli̱ rɛy bunä min di̱i̱t, kɛ kɔrɛ lätdɛ kɛɛ ini̱cial 15Å low-pa̱th pi̱li̱tɛr kɛ kumdɛ kɛɛ thɔ̱lbɛn area, matdɛ pi̱dhɛli̱ 6 nyin gëëkni̱ ti̱ kɔ̱c, kɛnɛ pöth-prötheth pi̱ktheli̱ kɛ riali̱ Gatan K2 tra̱ni̱thper pa̱ŋciɔn duŋ Gatan K2 pi̱i̱k i̱kä. Kɛ kui̱ RC-LH114-W datathɛt, ɛn ini̱cial mödɛl ɛmɛ cua riali̱kä kɛ wuɔ̱c denthi̱ti̱ min bum kä gëëkni̱ ma̱thki̱ (cua da̱a̱k kä kɔɔr kɔmpi̱lɛk denthi̱ti̱ rɛy UCSF Chimera). Kä mödɛli̱ tëë ci̱ ben raar (kä rethölucini̱ duŋ RC-LH114-W kɛnɛ RC-LH116 kɛn kɛ 3.91 kɛnɛ 4.16 Å, kɛ̈l kɛ̈ɛ̈li̱) kɛn cua kɛ la̱t cie mi̱ ɛ repi̱rɛn kɛ kui̱ ro̱undä min rɛwdɛ duŋ 3D ki̱la̱ththi̱pi̱këcin. Kä pa̱rti̱käli̱ tin ca la̱t kɛn cua kɛ mat rɛy ini̱cial 3D ki̱lɛth kɛnɛ ɣöö thiɛlɛ kɛ röm mi̱ bum kɛ ji̱ thi̱ääkädiɛn. Öberlap kiɛ thiɛl i̱thtra̱kciɛral pi̱e̱e̱ciɛri̱ ti̱ jɔc. Kɛ kɔr ro̱undä min rɛwdɛ duŋ 3D ki̱la̱ththi̱pi̱këciɔn, kä buɔ̱n in tekɛ rethölucin in di̱tni̱ jɛn cua kuany [Kɛ kui̱ RC-LH114-W, buɔ̱n kɛl ɛ 377,703 parti̱kali̱ (44.5%), kɛ kui̱ RC-LH116, tëkɛ buɔ̱n rɛw kärɔ̱, matdiɛn kɛɛliw ɛ W ɛ sagne4me. kɛ kɔr ini̱cial rötɛciɔn kɛ dääk mi̱ tɔt]. Kä pa̱rti̱kalni̱ tin ca kuany kɛn cua kɛ nyɔk kɛ-ɣɛktra̱k rɛy 400-pi̱dhɛl bɔk kɛnɛ ɣöö cua kɛ riali̱kä ɛ 3D riali̱diɛn i̱kä. Kä thɔ̱lbɛn ma̱thki̱ ɛ mi̱ ca nööŋ kɛ la̱tdɛ kɛɛ ini̱cial 15Å lɔw-pa̱th pi̱li̱tɛr, 3 pi̱dhɛl map ɣɛkpänciɔn kɛnɛ 3 pi̱dhɛl thɔ̱p ma̱thki̱. Mi̱ la̱tkɛ per-pa̱rti̱käl CTF ri̱pi̱i̱nemɛn, per-pa̱rti̱käl möciɔn kɔrreciɔn kɛnɛ ro̱und in rɛwdɛ duŋ per-pa̱rti̱käl CTF ripi̱nemɛn, 3D ri̱pi̱i̱nemɛn, thɔ̱lbɛn ma̱thkiŋ kɛnɛ pöth-pröthethiŋ kɛn la̱tkɛ kɛ kɔr ka̱a̱th kɛl kɛ riali̱dɛ i̱kä kɛ min ci̱ ben raar kä tɛkciɛr. Mi̱ la̱tkɛ FSC(Puri̱er Cɛl Kɔrrelɛciɔn Köëppi̱ciɛn) cuɛ ba̱li̱ö mi̱ 0.143 ŋok, kä rethölucini̱ nyin mödɛli̱ tin jɔak nyin RC-LH114-W kɛnɛ RC-LH116 kɛn kɛ 2.65 kɛnɛ 2.80Å, kɛ̈l kɛ̈ɛ̈li̱. Kä FSC kurb duŋ mödɛlä min jɔak cua nyoth rɛy Thurɛ 2. S17.
Prötien thi̱kuɛnthi̱ diaal cua kɛ ka̱m raar kä Yuni̱prötKB: LH1-β (PufB; Yuni̱pröt ID: Q6N9L5); LH1-α (PupA; Yuni̱pröti̱d: Q6N9L4); RC-L(PupL; Yuni̱pröt ID: Ö83005); RC-M(PupM; Yuni̱pröt ID: A0A4Z7); RC-Ɣ (Puɣa; Yuni̱pröt ID: A0A4Dh9); Prötien-W (PupW; Yuni̱pröt ID: Q6N1K3). I̱thwi̱th-mödɛl (45) cua la̱t kɛ ta̱th ɣömölöji̱ mödɛl duŋ RC, min tekɛ prötien thi̱kuɛnthi̱ duŋ RC-L, RC-M kɛnɛ RC-H kɛnɛ kri̱thtal i̱thtra̱kciɛr duŋ Rba. i̱thpi̱e̱röidɛth RC cua la̱t cie mi̱ ɛ tɛmpi̱lɛt (PDB ID: 5LSE) (46). La̱tdɛ "fit map" tool rɛy UCSF Chimera kɛ ro̱ŋdɛ kɛ mödɛl in ca nööŋ kä map (47), riali̱ prötien i̱thtra̱kciɛrä i̱kä, kɛnɛ köpaktɔr [4×BChl a (mönömer li̱brari̱ rɛthi̱duë ci̱öt = BCL), 2×BPh a (BPH), kɛl kiɛ rɛw ti̱ gööl kä UQ10 (U10), kɛl (iFeme) kɛnɛ 3,4-daiɣai̱dröɣɛkdhakarböni̱lkölin (QAK)] lätdɛ kɛɛ Kuot (48) kɛ matdɛ. Ni̱ mëë QAK cuɛ te thi̱n rɛy mönömer li̱brari̱, jɛn cua parameteri̱dhed kɛ la̱tdɛ kɛɛ eLBOW tool rɛy PHENIX (49).
Kɛ kɔrɛ, cua LH1 tha̱buni̱t täth. Kɛ tukdɛ, ɛn kuak ta̱thdɛ kärɔa rɛy PHENIX (49) cua la̱t kɛ ta̱thdɛ kärɔa tha̱a̱ŋ LH1 thi̱kuɛnthi̱ kɛ la̱tdɛ kɛɛ map kɛnɛ LH1-α kɛnɛ LH1-β prötien thi̱kuɛnthi̱ cie mi̱ ɛ input. Kuɛn LH1 tha̱buni̱t min ci̱ thuɔ̱k ɛlɔ̱ŋ, kämni jɛ raar kä kuɛn jɛ rɛy Coot, matdɛ thi̱kuɛnthi̱ min te thi̱n kɛ tet, kɛnɛ ɣöö riali̱ i̱thtra̱kciɛrä kɛɛliw i̱kä kɛ tet ɛ ŋot käni BCls rɛw mat thi̱n a (BCL) kɛnɛ i̱thpirillöktha̱nthin (CRT) [kɛ min ca lar ɛ Rps min lot rɔ Kä denthi̱ti̱ duŋ LH1 kɔmpi̱lɛk min te rɛydɛ kɛnɛ min ŋa̱ckɛ. I̱thpethi̱thni̱ (17)]. Kɔpi̱ LH1 tha̱buni̱t min ci̱ thuɔ̱k, kä lätni UCSF Chimera “Dɔkkiŋ Map Tuɔl” kɛ la̱thdɛ rɛy gua̱th in thi̱ääk kɛ nɔ̱n-mödɛl gua̱a̱th in te LH1 thi̱n, kä kɛ kɔrɛ ba cu riali̱kä rɛy Coot; nyɔk la̱tdɛ amääni̱ mi̱ ci̱ LH1 tha̱buni̱ti̱ni̱ diaal kulɛ mödɛli̱d. Kɛ kui̱ RC-LH114-W i̱thtra̱kciɛr, ɛ wuɔ̱cdɛ kɛ denthi̱ti̱ min /ka̱n da̱a̱k rɛy Coot, ɛn prötien ɛ mi̱ ca da̱a̱k kä nɔ̱n-prötien kɔmpönɛni̱ tin ci̱ duɔth rɛy USCF Chimera map kɛnɛ ɣöö ɛn Autobuild tool cua la̱t kɛ yiɛthdɛ piny ini̱cial mödɛl, kɛnɛ tha̱buni̱ti̱ni̱ tin ci̱ duɔth (prötien-W) Mödɛliŋ. Rɛy PƐNI̱K(49). Matdɛ ɛni̱ thi̱kuɛnthi̱ mi̱ ci̱ bath kä mödɛl in ci̱ ben raar rɛy Kuot (48), kɛnɛ ɣöö kɛ kɔrɛ ba tha̱buni̱t kɛɛliw riali̱kä kɛ tet. Kä denthi̱ti̱ min ci̱ duɔth kä /ka̱n da̱a̱k cuɛ ro̱ŋ kɛ mat lipidni̱ (PDB mönömer li̱brari̱ ID duŋ CDL = CDL, POPC = 6PL kɛnɛ POPG = PGT), β-DDM di̱thɛrjɛn (LMT) kɛnɛ UQ10 möli̱ki̱öli̱ (U10). La̱tdɛ PHENIX öpti̱mai̱dhëcin (49) kɛnɛ manual öpti̱mai̱dhëcin rɛy Coot (48) kɛ riali̱dɛ i̱kä kɛ ini̱cial mödɛl amääni̱ mi̱ ci̱ mödɛl i̱thtathti̱thtikni̱ kɛnɛ ta̱a̱ in guic kɛ min ro̱ŋ /cɛ bi̱ lɛ räth ni̱ kä ɣöö bɛ rɔ rep. Kɛ jɔakdɛ, lätdɛ kɛɛ LocIthkiɛl(50) kɛ riali̱ lɔkal map i̱kä, kɛ kɔrɛ bɛ thärkäli̱ kɔ̱kiɛn ti̱ ŋuan la̱t kɛ mödɛli̱ min /ka̱n da̱a̱k kä denthi̱ti̱ kɛnɛ autömatik kɛnɛ manual öpti̱mai̱dhëcin.
Kä peptaidni̱ kɛ̈l kɛ̈ɛ̈li̱, köpaktɔri̱ kɛnɛ lipidni̱ kɔ̱kiɛn kɛnɛ kuinöni̱ ti̱ ca yiath piny rɛy denthi̱ti̱ni̱kiɛn kɛ̈l kɛ̈ɛ̈li̱ cua kɛ nyoth rɛy Thurɛ 1 kɛnɛ 2. S18 ɛ wä kä S23. Kä läär i̱thtathti̱thtikal duŋ mödɛlä min jɔak cua nyoth rɛy Tɛbɛlä S1.
Ɛni̱ mi̱ ca lɛy kɛ duɔ̱ɔ̱p mi̱ dɔ̱ŋ, ɛn UV/Bi̱th/NIR abdhɔ̱pciɔn i̱thpekti̱ra cua kɛ ruuli̱ kä Kari̱60 i̱thpekti̱röpötömi̱ti̱r (Agilent, USA) kä 1 nm kamdiɛn ɛ tokɛ kä 250 nm ɛ wä kä 1000 nm kɛnɛ thaak matdä duŋ 0.1s.
La̱tdɛ tha̱mpuɔl rɛy kuarthi̱ kubɛtte kɛ 2 mm duɔ̱p ɛ wä kä A880 duŋ 1, kɛnɛ ɣöö bɛ abdhɔ̱pciɔn i̱thpekti̱ra̱m ruuli̱ kam 400 kɛnɛ 1000 nm. Kä thärkular di̱kröik i̱thpekti̱ra cua kɛ ruuli̱ kä Jathkö 810 i̱thpekti̱röpölari̱mi̱ti̱r (Jathkö, Japan) kä 1 nm kam 400 nm kɛnɛ 950 nm kä i̱thkan rɛt duŋ 20 nm min-1.
Kä mölar ɣɛktinciɔn köëppi̱ciɛn ɛ mi̱ ca jiek ɛ la mi̱ ca kɔɔr kɔmpi̱lɛk jakä kuiy ɛ wä kä A880 mi̱ thi̱ääk kɛ 50. Jam 10μl bɔli̱öm rɛy 990μl baindiŋ bupper kiɛ methanöl, kɛnɛ ɣöö bɛ abdhɔ̱pciɔn i̱thpekti̱ra̱m ruuli̱ kɛ pɛ̈th kɛ jak BChl kä kuiy. Kä BChl min te rɛy methanöl tha̱mpuɔlä kɛl cua kalculët ɛ ɣɛktinciɔn köëppi̱ciɛn kä 771 nm duŋ 54.8 mM-1 cm-1, kɛnɛ ɣöö cua köëppi̱ciɛn mi̱ ci̱ riaw jiek (51). Da̱a̱kɛ min ca thɛm kä BChl kɔncentrɛciɔn ɛ 32 (RC-LH114-W) kiɛ 36 (RC-LH116) kɛ jiek kɔre kɔmpi̱lɛk kɔncentrɛciɔn, min kɛ kɔrɛ ba cu la̱t kɛ jiek abdhɔ̱pciɔn i̱thpekti̱ra̱m duŋ tha̱mpuɔlä mi̱ cäät min ca ruuli̱ rɛy bupper Ɛkti̱nciɔn köëppi̱ciɛn. duɔ̱p ti ci ro̱m. Cua thëmdɛ luɔc kä diɔ̱k kɛ kui̱ tha̱mpuɔlä kɛl, kɛnɛ ɣöö cua aberig abdhɔrbɛnci̱ duŋ BChl Qy makdhi̱ma̱m la̱t kɛ kalkulɛciɔn. Kä ɣɛktinciɔn köëppi̱ciɛn duŋ RC-LH114-W cua thɛm kä 878 nm ɛ 3280±140 mM-1 cm-1, niɛ gua̱a̱ mɔ ɛn ɣɛktinciɔn köëppi̱ciɛn duŋ RC-LH116 cua thɛm kä 880nm ɛ 3800±30 mM-1 cm-1.
UQ10 cua kuɛn kɛ mëë ca lar ɛ methɔd rɛy (52). Rɛydɛ mi̱ ciɛk, ribɛrthi̱ pɛth HPLC (RP-HPLC) cua la̱t kɛ la̱tdɛ kɛɛ Agilɛn 1200 HPLC thi̱thtɛm. La̱tdɛ kɛɛ 0.02 nmol duŋ RC-LH116 kiɛ RC-LH114-W rɛy 50μl duŋ 50:50 methanöl:klöröpuɔm min te 0.02% (w/v) perrik klɔraid, kɛnɛ tuɔmdɛ kä pre-ekui̱li̱brɛted Beckman Kɔultɛr Ultrai̱thpi̱e̱r m4-1. 40°C rɛy HPLC thɔ̱lbɛn (80:20 methanöl:2-pröpanöl) kä ×25 cm kɔlöm. La̱tdɛ ai̱thökratik eluciɔn rɛy HPLC thɔlbɛn kɛ gui̱c abdhɔrbɛnci̱ kä 275 nm (UQ10), 450 nm (karötɛnɔidni̱) kɛnɛ 780 nm (BChl) kɛ thaak 1. Kä pi̱i̱k rɛy 275 nm krömatögra̱m kä minitni̱ 25.5 cua mat kɛɛl, min cuɛ thiɛl kɔmpuɔɔni̱ kɔ̱kiɛn ti̱ cua jiek. Kä gua̱a̱th in ca mat thi̱n cua la̱t kɛ kalkulɛciɔn duŋ mölar ma̱k duŋ UQ10 min ca woc kɛ rɛpɛrɛn kä kali̱brɛciɔn kurb min ca kalculët kä injɛkciɔn duŋ pi̱o̱o̱r i̱thtandardni̱ ɛ tokɛ kä 0 ɛ wä kä 5.8 nmol (Pi̱guur S14). Tha̱mpuɔl kɛl cua die̱l guäc rɛy kä ti̱ ca nyɔk kɛ lätni̱ diɔ̱k, kɛnɛ ɣöö cua lat i̱ ci̱ duer cuɛ wä kɛɛl kɛ SD duŋ aberig.
Ɛn thuluciɔn min tekɛ RC-LH1 kɔmpi̱lɛk kɛ makdhi̱ma̱m Qy ​​abdhɔ̱pciɔn duŋ 0.1 cua riali̱kä kɛ 30 μM mi̱ ci̱ lɔc ji̱o̱ktuɔ̱ruɔ̱k thai̱tökrɔm c2 jakä kuiy (Merk, UK) kɛnɛ 0 ɛ wä kä 50 μMUQ2 (Merk, UK). Tha̱mpuɔli̱ diɔ̱k ti̱ 1-ml cua kɛ riali̱kä kä UQ2 kɔncentrɛciɔn kärɔa kɛnɛ ɣöö cua kɛ inkubɛted kɛ wäär rɛy muɔ̱th kä 4°C kɛ lärɛ i̱ ci̱kɛ thuɔ̱k kɛ ada̱ptɛciɔn rɛy muɔ̱th ɛ ŋot /ka̱nɛ ni̱ thɛm. Kä thɔ̱luciɔn cua la̱th rɛy OLIS RSM1000 mödular i̱thpekti̱röpötömi̱ti̱r mi̱ ca riali̱kä kɛ 300 nm pi̱lɛm/500 lany gi̱rɛtiŋ, 1.24 mm rɛydɛ, 0.12 mm däär kɛnɛ 0.6 mm raar i̱thli̱tni̱. Ɛ 600 nm lɔɔŋ pa̱th pi̱li̱tɛr ɛ mi̱ ca la̱th kä thok tha̱mpuɔlä pötöti̱o̱b kɛnɛ repi̱rɛn pötömalti̱pi̱e̱r ti̱o̱b kɛ wuɔ̱c buayä min ci̱ rɔ gɛr. Kä abdhɔrbɛnci̱ cua guic kä 550 nm kɛ thaak integrɛciɔn duŋ 0.15 s. Kä buay in ci̱ rɔ rep ɛ mi̱ bä raar kä 880 nm M880F2 LED (Buay in Bëë raar kä Dai̱öd) (Thorlabni̱ Ltd., UK) kɛ rɛy pai̱ber optik kɛbel kä 90% buɔ̱mdɛ kɛ rɛy DC2200 kɔnti̱röllɛr (Thorlabni̱ Ltd., UK) kɛnɛ ɣöö jɛn bä raar ɛ wä kä guɔ̱ɔ̱k in tuɔɔk buay thi̱n kä °0. Kä thëm biem ɛ mi̱ gua̱c kɛ mi̱rrör kɛ luɔ̱c ɛni̱ buay min /ka̱n tok kɛ käp ɛ tha̱mpuɔl. Guɛc abdhɔrbɛnci̱ 10 s ɛ ŋot /kenɛ ni̱ cop kä 50 s. Kɛ kɔrɛ cua abdhɔrbɛnci̱ nyɔk kɛ guäc kɛ 60 th rɛy muɔ̱th kɛ thëm kä ɣöö bɛ kuinölöl i̱thpɔntaneöth mi̱ jak thai̱tökrɔm c23 + kä kuiy (guic Thurɛ S8 kɛ kui̱ data ni̱ ti̱ /ka̱n met lät).
Kä data ni̱ cua kɛ la̱t ɛ la̱thkɛ li̱ni̱e̱e̱r ini̱cial rɛt rɛydɛ 0.5 ɛ wä kä 10 th (ɛ tekä UQ2 kɔncentrɛciɔn) kɛnɛ aberɛjiŋ rɛtni̱ nyin tha̱mpuɔli̱ diɔ̱k diaal kä UQ2 kɔncentrɛciɔn kärɔa. Kä RC-LH1 kɔncentrɛciɔn cua kalculët ɛ ɣɛktinciɔn köëppi̱ciɛn kɛ̈l kɛ̈ɛ̈li̱ cua la̱t kɛ riali̱ rɛtdä kä rɛy katalai̱tik eppi̱ciɛnci̱, ​​cua plɔt rɛy Ori̱ji̱n Prö 2019 (Oriji̱nLab, USA), kɛnɛ ɣöö cua la̱th kä Mikaeli̱th-Mɛnten mödɛl kɛ jiek kä min jɔc kä Km kɛnɛ Kkat ba̱liömmi̱.
Kɛ kui̱ thëm abdhɔ̱pciɔn tra̱ni̱thiɛn, ɛn RC-LH1 tha̱mpuɔl cua jakä kuiy ɛ wä kä ~2μM rɛy IMAC bupper min te 50 mM thɔ̱diöm athkɔrbɛt (Merk, USA) kɛnɛ 0.4 mM Terbutin (Merk, USA). Athkɔrbik athi̱d ɛ mi̱ la̱tkɛ cie mi̱ ɛ thɛkripi̱cial elɛkti̱rɔn dönör, kɛnɛ tert-butaklöpen ɛ mi̱ lät cie QB ini̱bi̱tɔr kɛ lärɛ i̱ min di̱tni̱ jɛn kä RC dönör bɛ cu ŋot ɛ la mi̱ ci̱ kuɛ̈ɛ̈ (min la, /ciɛɛ pötöɣɔkthaidhed) rɛy la̱t thëm kɛɛliw. Ɛ thia̱k kɛɛ 3 ml duŋ tha̱mpuɔlä cua mat kä thëll mi̱ wil rɔ (kɛ pek mi̱ 0.1 m rɛy dai̱mi̱ti̱r, 350 RPM) kɛ 2 mm optikal path bäärä kɛ lärɛ i̱ tha̱mpuɔl rɛy lɛthɛr path bɛ tekɛ gua̱a̱th mi̱ ro̱ŋ kɛ kui̱ ada̱ptɛciɔn mi̱ col kam ɣɛkthi̱tɛciɔn pulthni̱. La̱tdɛ ~100-fs lɛthɛr pulthni̱ kɛ rëp Ti: Tha̱ppai̱r lɛthɛr thi̱thtɛm (I̱thpektra Pi̱i̱dhikni̱, USA) kɛ jak tha̱mpuɔlä kä 880 nm kä rɛt mi̱ loc rɔ kä 1 kHz (20 nJ kɛ kui̱ NIR kiɛ 100 nJ kɛ kui̱ Bi̱th). Ɛ ŋot kän data ni̱ ruuli̱, la̱th tha̱mpuɔl kä buay mi̱ ci̱ rɔal kɛ minitni̱ ti̱ 30. Ɛkpöthɛciɔn bɛ QA jakä /cɛ lät (dɔ̱ŋ bɛ QA jakä kuiy kä kɛɛl kiɛ kä rɛw). Duŋni̱ ɣöö ŋa̱cɛ jɛ ɛn ɣöö la̱t ɛmɛ derɛ rɔ luɔc jɔk kɛ ɣöö kɛ kɔr gua̱th mi̱ bäär mi̱ ci̱ ciaaŋdɛ rɔ gɛr rɛy muɔ̱th, RC bɛ rɔ nyɔk kɛ luny ɛ määth kä lät QA. Ɛ Ɣeliöth i̱thpekti̱römi̱ti̱r (Ultrapa̱th Thi̱thtɛm, USA) cua la̱t kɛ thëm tra̱ni̱thiɛn i̱thpekti̱ra kɛ ja̱nydɛ kɛɛ thaak mi̱ -10 ɛ wä kä 7000 ps. La̱tdɛ Thɔ̱rpëth Xplörɛr thɔpwɛɛr (Ultrapa̱th Thi̱thtɛmni̱, USA) kɛ wuɔ̱c data ni̱ thɛtni̱, kɛ kɔrɛ ba kɛ mat kɛɛl kɛnɛ i̱thtandardaidhed. La̱tdɛ kɛɛ KarpetBiew thɔpwɛɛr pakɛmɛn (Lait Kɔnberciɔn Ltd., Lithuania) kɛ la̱tdɛ kɛɛ data ni̱ ti̱ ca mat kɛɛl kɛ jiek i̱thpekti̱ra mi̱ thi̱ääk kɛ däk, kiɛ la̱tdɛ kɛɛ pa̱ŋciɔn min mat ɣɛkpönɛni̱ ti̱ ŋuan kɛ min ca loc ɛ ini̱thtrumɛn kɛ kui̱ kä ɣöö bɛ rɔ lot kɛ thi̱ŋgil-wɛblɛŋthi̱ i̱thpekti̱ral eboluciɔn rɛy Ori̱jin, USALa).
Cie min ca lat nhial (53), ɛ pötöthi̱änthethtik pilim min tekɛ LH1 kɔmpi̱lɛk mi̱ thiɛl RC kɛnɛ peri̱peral LH2 antenna cua kɛ riali̱kä. Kä membi̱ran cua jakä kuiy rɛy 20 mM tri̱th (pH 8.0) kɛ kɔrɛ cua la̱th rɛy kuarthi̱ kubɛt kɛ 2 mm optikal path. Ɛ 30nJ lɛthɛr pulth cua la̱t kɛ jak tha̱mpuɔl kä 540 nm kɛ ja̱nydɛ kɛɛ thaak mi̱ -10 ɛ wä kä 7000 ps. La̱tdɛ data thɛt cie min ca lat kɛ kui̱ Rps. pal tha̱mpuɔl.
Kä membɛrɛn cua pelleted ɛ thɛnti̱ri̱pugɛciɔn kä 150,000 RCF kɛ thaakni̱ 2 kä 4°C, kɛ kɔrɛ cua abdhɔrbɛnci̱dɛ kä 880 nm nyɔk kɛ thɔ̱thpɛndiŋ rɛy 20 mM tri̱th-HCl (pH 8.0) kɛnɛ 200 mM NaCl. Käm membi̱ran raar ɛ määth kɛ lëpdɛ rɛy 2% (w/v) β-DDM kɛ thaak 1 rɛy muɔ̱th kä 4°C. Kä tha̱mpuɔl cua jakä kuiy rɛy 100 mM trai̱ethi̱lammöniöm karbönat (pH 8.0) (TEAB; Merk, UK) ɛ wä kä prötien kɔncentrɛciɔn duŋ 2.5 mg ml-1 (Baö-Rad anali̱thi̱th). La̱tdɛ mi̱ dɔ̱ŋ cua la̱t ɛ tuɔɔk ni̱ kä ca̱p ëë ca ka̱m raar ni̱ wal (54), tuɔk kɛ jɛ kɛ di̱luciɔn duŋ 50 μg prötien rɛy matdä 50 μl TEAB min tekɛ 1% (w/v) thɔ̱diöm laurate (Merck, UK). Kɛ kɔr thɔ̱ni̱këcin kɛ 60 s, jɛn cua jakä kuiy kɛ 5 mM tri̱th(2-karbökthi̱ethyl)pöthpi̱i̱n (Merk, UK) kä 37°C kɛ minitni̱ ti̱ 30. Kɛ kui̱ S-alki̱lɛciɔn, inkubɛt tha̱mpuɔl kɛ 10 mM methyl S-methylthiömethanetha̱lpönat (Merck, UK) kɛnɛ matdɛ kä 200 mM ai̱thöpröpanöl i̱thtɔk tha̱luciɔn kɛ minitni̱ 10 kä lëth duëël. Pröti̱o̱laitik dai̱jɛciɔn cua la̱t ɛ matdɛ 2 μg trai̱pthin/endöprötienath Li̱th-C mi̱ ca li̱ɔɔm (Prömega UK) kɛnɛ ɣöö cua inkubɛted kä 37°C kɛ thaakni̱ 3. Kä laurate thɔ̱rpaktan cua woc ɛ matdɛ 50 μl ethyl acëtat kɛnɛ 10 μl 10% (v/v) LC gi̱rɛd trai̱pluöröacetik athi̱d (TFA; Thermö Pi̱ther Thaanytipik, UK) kɛnɛ vortɛkthiŋ kɛ 60 s. Kä pe̱k dääkä cua kap nhial ɛ thɛnti̱ri̱pugɛciɔn kä 15,700 RCF kɛ minitni̱ 5. Kɛ mëë ca lar ɛ prötokɔ̱l ëë lätdɛ, ɛ C18 i̱thpin kɔlöm (Thermö Pi̱ther Thaanytipik, UK) cua la̱t kɛ tiit mi̱ di̱i̱t kɛ athpi̱rɛt kɛnɛ dethalt kä pe̱k in te piny min te peptaid thi̱n. Kɛ kɔr kä mëë cɛ kööt ɛ ba̱ki̱öm thɛnti̱ri̱pugɛcin, ɛn tha̱mpuɔl cua liɔm rɛy 0.5% TFA kɛnɛ 3% acëtönitrail, kɛnɛ ɣöö cua 500 ng die̱l guäc ɛ nanöplöw RP krömatögra̱pi̱ matdɛ kɛɛ ma̱th i̱thpekti̱römeti̱ri̱ kɛ la̱tdɛ kɛɛ thi̱thtɛm parami̱ti̱ri̱ tëë ca lat ni̱ wän.
La̱tdɛ MadhKuant v.1.5.3.30 (56) kɛ ŋi̱e̱c prötien kɛnɛ kua̱nti̱pi̱këcin kɛ gör Rps. paluthtiri̱th prötieöm databɛth (www.yuni̱pröt.org/prötio̱mni̱/UP000001426). Kä ma̱th i̱thpekti̱römeti̱ri̱ prötieömikni̱ data cua kɛ la̱th rɛy PrötiömeƔɛkci̱ɛnji̱ Alliance kɛ rɛy PRIDE pa̱rtnɛr repo̱thi̱töri̱ (http://prötiömethɛntral.prötieömikɛkci̱ɛnji̱.org) piny datathɛt identi̱pi̱e̱e̱r PXD020402.
Kɛ kui̱ anali̱thi̱th ɛ RPLC matdɛ kɛɛ elɛktröi̱thprey aönaidhɛciɔn ma̱th i̱thpekti̱römeti̱ri̱, ɛn RC-LH1 kɔmpi̱lɛk cua riali̱kä kä wild-taap Rps. Mi̱ la̱tkɛ jɛ kɛ ca̱p ëë ca ka̱m raar ni̱ wal (16), kä prötien kɔncentrɛciɔn min ca nööŋ rɛy paluthtiri̱th thëlli̱ cuɛ 2 mg ml-1 rɛy 20 mM Ɣepeth (pH 7.8), 100 mM NaCl kɛnɛ 0.03% (w/v) β- (Baö-Rad anali̱thi̱th) ) DDM. Kɛ mëë ca lar ɛ prötokɔ̱l duŋ manupakciɛr, la̱tdɛ 2D puri̱pi̱këcin kit (GE Ɣelthkɛr, USA) kɛ kämdɛ raar 10 μg prötien kɛ ca̱p prɛcipi̱tɛciɔn, kɛnɛ wuɔ̱c prɛcipi̱tɛciɔn rɛy 20 μl 60% (v/v) puɔrmik athi̱d (FA), 20% (v/v) Athetönitrail/water (20%)vter. Mai̱kröli̱ti̱ri̱ dhie̱e̱c cua kɛ die̱l guäc ɛ RPLC (Dionex RSLC) matdɛ kɛɛ ma̱th i̱thpekti̱römeti̱ri̱ (Madhith UHR-TOF, Bruker). La̱tdɛ MabPac 1.2×100 mm kɔlöm (Thermö Pi̱ther Thaanytipik, UK) kɛ dääkdiɛn kä 60°C kɛnɛ 100μlmin -1, kɛ gi̱rɛdiɛn duŋ 85% (v/v) thɔ̱lbɛn A [0.1% (v/v) FA kɛnɛ 0.02% (kue% thɔ̱lbɛn] TFA(kue%) thɔ̱lbɛn a5. [0.1%(v/v) FA kɛnɛ 0.02%(v/v) rɛy 90%(v/v) acëtönitrail TFA] Mi̱ la̱tkɛ i̱thtandar elektröthpi̱rɛy aönaidhɛciɔn thɔ̱rth kɛnɛ di̱puɔlt parami̱ti̱ri̱ kɛ minitni̱ ti̱ läny 60, kä ma̱th i̱thpekti̱römi̱ti̱r bɛ 100 ɛ wä kä 2750 m/z (ma̱th-kɛ-ca̱rji̱ rɛci̱ö). Kɛ luäk duŋ ExPAthi̱ baöinpuɔrmatikni̱ rethɔɔr pɔrtal FindPept tool (https://web.expasy.org/findpept/), map i̱thpekti̱ra̱m in di̱i̱t ɛ wä kä tha̱buni̱ti̱ni̱ nyin kɔmpi̱lɛk.
Kä thëlli̱ cua kɛ pith kɛ thaakni̱ ti̱ 72 piny 100 ml NF-mi̱ tɔt (10μMm-2 th-1), mi̱diöm (30μMm-2 th-1) kiɛ mi̱ di̱i̱t (300μMm-2 th-1) buay. M22 mëdiöm (M22 mëdiöm min ca ammöniöm tha̱lpët woc thi̱n kɛnɛ ɣöö ba thɔ̱diöm thukcinat gɛr ɛ thɔ̱diöm acëtat) rɛy 100 ml i̱thki̱ru-top buɔ̱l (23). Rɛy thärkäli̱ 30-ni̱ dhie̱e̱c, 0.1 mai̱krɔn gi̱laath beadni̱ cua kɛ beadni̱ kä bɔli̱öm rɛci̱ö duŋ 1:1 kɛ lai̱thi̱ thëlli̱ kɛnɛ ɣöö cua kɛ jakä kɔ̱c kä ɣaci̱ kɛ minitni̱ 5. Kä ŋɔak tin /ci̱ li̱ööm, thëlli̱ tin /ka̱n tiath kɛnɛ gi̱laath bi̱i̱dni̱ cua kɛ woc ɛ thɛnti̱ri̱pugɛciɔn kä 16,000 RCF kɛ minitni̱ 10 rɛy benchtɔp mai̱kröthɛntri̱pugɛciɔn. Kä membi̱ran cua da̱a̱k rɛy Ti 70.1 rötɔr kɛ 100,000 RCF rɛy 20 mM tri̱th-HCl (pH 8.0) kɛ 40/15% (w/w) thukröth gi̱rɛdiɛn kɛ thaakni̱ 10.
Cie min ca lat rɛy la̱tdan ëë nhiam, immi̱o̱nödetekciɔn duŋ Hi̱th tag kä PufW (16). Rɛydɛ mi̱ ciɛk, ɛn kɔɔr kɔmpi̱lɛk mi̱ ca riali̱kä (11.8 nM) kiɛ membi̱ran min tekɛ kɔncentrɛciɔn mi̱ cäät kä RC (min jiëkɛ ɛ ɣɔkdhi̱dɛciɔn min kuiy dääk i̱thpekti̱ra̱mä kɛnɛ ɣöö bɛ rɔ lot kɛ löd min tekä i̱thtɛn jel) rɛy 2x SDS lödiŋ bupper (Merck, UK) mi̱ ca liɔm ni̱ kä rɛɛw. Kä prötieni̱ cua kɛ da̱a̱k kä replika 12% bai̱th-tri̱th NuPage jel (Thermö Pi̱ther Thaanytipik, UK). Ɛ jel cua biɛl kɛ Kuomaththi̱ Bri̱lli̱ant Blue (Baö-Rad, UK) kɛ kui̱ kä ɣöö ba RC-L tha̱buni̱t kuëŋ thi̱n kɛnɛ guäcdɛ. Kä prötien min tekä jel in rɛwdɛ cua naŋ kä methanöl-ɛkti̱bɛted pöli̱bai̱nai̱lideen pluoraid (PVDF) membɛrɛn (Thermö Pi̱ther Thaanytipik, UK) kɛ kui̱ immi̱o̱nöaththai̱. Kä PVDF membi̱ran cua gaŋ rɛy 50 mM tri̱th-HCl (pH 7.6), 150 mM NaCl, 0.2% (v/v) Tween-20 kɛnɛ 5% (w/v) i̱thki̱m cak puɔ̱dɛr, kɛ kɔrɛ cua inkubɛted kɛ anti̱-Ɣi̱th pri̱märi̱ anti̱bo̱di̱ (rɛy mHCl bupper the mH0p 7.6), 150 mM NaCl kɛnɛ 0.05% (v/v) kam-20] rɛy 1:1000 A190-114A, Bethi̱l Laböratöri̱, USA) kɛ thaakni̱ 4. Kɛ kɔr kä mëë ca lak ni̱ kä 3 kɛ minitni̱ da̱ŋ 5 rɛy ani̱buɔdi̱ bupper, ɛn membɛrɛn cua mat kɛ ɣɔ̱rthɛradith perɔkthai̱dɛth (Thi̱gma-Aldri̱k, UK) anti̱-muɔth thɛkɔnderi̱ ani̱buɔdi̱ (diluted 1:10,000 rɛy ani̱buɔdi̱ bupper) W Inkubɛt kɛ jakdɛ kä ɣöö ba ŋa̱c (minitni̱ 5 kɛ kɔr kä mëë ca lak ni̱ kä 3 rɛy ani̱buɔdi̱ chelumiththen bupper CESTAR0) (Thai̱najen, I̱tali̱) kɛnɛ Amertha̱m I̱mëjɛr 600 (GE Ɣelthkɛr, UK).
Mi̱ thuɔ̱rkɛ buɔ̱mdɛ min ca da̱a̱k kä i̱thtɛni̱d jel kärɔa kiɛ immi̱o̱nöaththai̱ lɛn, matdɛ gua̱a̱th in te piny pi̱i̱kä kɛnɛ kalkulɛciɔn rɛci̱ö duŋ RC-L (i̱thtɛni̱d jel) kɛnɛ Prötien-W (immi̱o̱nöaththai̱), rɛy ImageJ (57) Prötheth thurɛkä. Rëci̱öni̱ ti̱ti̱ cua kɛ gɛr ɛ la mölar rɛci̱öni̱ ɛ latdɛ i̱ jɛn rɛci̱ö duŋ RC-L ɛ wä kä prötien-W rɛy pi̱o̱o̱r RC-LH114-W tha̱mpuɔl cuɛ 1:1 kɛnɛ ɣöö cua data ni̱ diaal thɛt jakä wä kɛɛl kɛ ta̱a̱dɛ.
Kɛ kui̱ ŋɔaani̱ tin kɔ̱ŋ tin ba gɔ̱r piny kɛ kui̱ ruac ɛmɛ, guic http://adbances.sciencemag.org/cgi/kɔntɛnt/full/7/3/eabe2631/DC1.
Nɛmɛ ɛ wargak mi̱ ca lɛp mi̱ ca da̱a̱k piny ŋuɔ̱tni̱ tin ca gɔ̱r piny kä Creative Commons Attribution Lai̱thɛn. Kä arti̱kɔ̱l cuɛ nhɔk ni̱ ɣöö ba la̱t ɛ thiɛl ga̱ŋ, dääkdɛ, kɛnɛ nyɔkdɛ kɛ no̱o̱ŋdɛ rɛy ɛni̱ mi̱diöm piny kä min ca la̱t ëë nhiam lat ɛ gɔaa.
Ŋäc: Kɔn thiëc nɛy ji̱ kärɔa ɛn ɣöö biɛ la̱th kä email address kɛ ɣöö bi ram min ci la̱th lät ŋa̱c ɛn ɣöö go̱ri ɣöö bɛ emaildu nɛn kä /ciɛ spam. /Ci̱ nɛy ɛ bi käp kɛ email addressni̱.
Thiec ɛmɛ lätdɛ kɛ ɣöö ba ji̱ thɛm mi ɛ ji̱n ram mi ci ben kä ba ji̱ gaŋ kä ɣöö biɛ la̱th lät.
Dëbi̱t J.K.Thɔmpthɔn, Park Qian, Pi̱lip J. Jakthɔn, Kaitlin M. Parieth, Dariuth M. Nieddhiwi̱dhki̱, Eli̱dhabɛth C. Marti̱n, Dëbi̱t A. Pärmɛr, Lörna A. Malön, Rebɛkka F. Thompthɔn, Neil A. Ranthɔn, Daniel P Kannippe, Mark J. Dikman, Dewey Ɣi̱rma̱kö, Kritho Ɣo̱ltɛn.
Kä ɣai̱-rethölucin i̱thtra̱kciɛr duŋ lai̱t trap 1 kɔmpi̱lɛk rɛy riakciɔn thäntɛr cuɛ ŋuni̱ ŋäc mi̱ ji̱di̱t rɛy kuinɔn dai̱na̱mikni̱.
Dëbi̱t J.K.Thɔmpthɔn, Park Qian, Pi̱lip J. Jakthɔn, Kaitlin M. Parieth, Dariuth M. Nieddhiwi̱dhki̱, Eli̱dhabɛth C. Marti̱n, Dëbi̱t A. Pärmɛr, Lörna A. Malön, Rebɛkka F. Thompthɔn, Neil A. Ranthɔn, Daniel P Kannippe, Mark J. Dikman, Dewey Ɣi̱rma̱kö, Kritho Ɣo̱ltɛn.
Kä ɣai̱-rethölucin i̱thtra̱kciɛr duŋ lai̱t trap 1 kɔmpi̱lɛk rɛy riakciɔn thäntɛr cuɛ ŋuni̱ ŋäc mi̱ ji̱di̱t rɛy kuinɔn dai̱na̱mikni̱.
©2021 Amëri̱ka Aththöciëcin kɛ kui̱ Adbanthmɛn duŋ Thaany. cuŋ diaal ca kɛ tɔ̱w. AAAS ɛ ram kɛl kä HINARI, AGORA, OARE, CORUS, CLOCKSS, CrossRep kɛnɛ COUNTER. ThaanyAdbanthni̱ ISSN 2375-2548.